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病毒感染免疫檢驗分析:慢性乙型肝炎病毒感染免疫耐受期特點和機制探討

[摘要] 慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染免疫耐受期與HBV感染非活動狀態(tài)患者，肝臟炎癥活動度為G0者，僅占10%~20%，肝小葉及匯管區(qū)均未見或僅有少許炎細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)與肝實質(zhì)交界處無炎癥表現(xiàn)，匯管區(qū)無明顯擴大，無明顯纖維組織增生。肝星形細(xì)胞（HSCs）、樹突狀細(xì)胞（DCs）、庫普弗細(xì)胞（KCs）和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（LSECs）等肝非實質(zhì)細(xì)胞, 不但參與人體對病毒感染的抵抗和防御，還在HBV慢性感染免疫耐受期起著重要作用。

[關(guān)鍵詞] HBV慢性感染；免疫耐受；肝組織病理

HBV慢性感染免疫耐受是指機體對乙肝病毒抗原不產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，患者的免疫系統(tǒng)無法有效識別和清除乙肝病毒，機體沒有清除乙肝病毒的免疫能力。感染HBV后，一部分人將成為HBV攜帶者和慢性肝炎患者，有20％～40％的HBV慢性感染患者會發(fā)展成為重型肝炎、肝硬化或肝癌。慢性乙肝世界范圍內(nèi)廣泛分布，全球約有3.6億人持續(xù)感染HBV，中國是高流行區(qū)。HBV并不直接導(dǎo)致肝細(xì)胞病變，機體不同的免疫狀態(tài)導(dǎo)致HBV感染后結(jié)局有很大差異[1]。本文重點探討免疫耐受狀態(tài)下的流行病學(xué)、臨床病理學(xué)特點及其機制進(jìn)展。

1 HBV感染免疫耐受期流行病學(xué)和臨床病理特點

乙型肝炎的自然發(fā)展過程受到許多因素的影響，一方面是感染時的年齡、病毒自身因素（如基因型、基因有無變異以及病毒復(fù)制水平高低），另一方面是宿主自身因素，包括年齡、性別和免疫力大小以及其他因素，例如伴有其他病毒感染、酗酒等。臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜多樣，從非活動性HBsAg攜帶者狀態(tài)到慢性肝炎，亞臨床狀態(tài)到急重性肝炎和暴發(fā)性肝炎，甚至肝硬化等多種變化[2]。有20%~40%的慢性HBV患者會進(jìn)展為肝硬化、肝癌和晚期肝病。慢性HBV患者往往發(fā)展過程緩慢、癥狀輕微，感染的早期往往缺乏明顯的臨床表現(xiàn)，甚至癥狀輕微不易覺察。流行病學(xué)表明，在高流行區(qū)，主要的傳染途徑是圍生期的垂直感染，嬰幼兒和兒童早期從具有肝病家族史的人群中感染。在低流行發(fā)病區(qū)，特別是歐美發(fā)達(dá)國家，體液傳播方式，靜脈吸毒和高危性行為是乙肝的主要傳染途徑。

慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）中指出，兒童早期HBV感染的自然史可分為免疫耐受期、免疫清除期、非活動性復(fù)制期和再活動期四個期。免疫耐受期：臨床上患者常無癥狀，肝功能多為正常，人體血清HBsAg和HBeAg檢測呈陽性改變， HBV DNA載量往往高于106 IU/ml，但丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）檢測在正常范圍內(nèi)或者正常高值。據(jù)文獻(xiàn)報道，肝組織穿刺活檢病理診斷表明，免疫耐受期HBV感染者，絕大多數(shù)為青壯年，一般年齡不大于30歲，可能與該年齡段患者學(xué)習(xí)、工作競爭壓力大以及婚姻和生育要求有關(guān)，目的是得到可觀數(shù)據(jù)從而進(jìn)行針對性治療。HBV感染者中，5歲以下嬰幼兒30%左右有發(fā)展成慢性感染的可能，而5歲以后感染者僅有5%～10％發(fā)展為慢性感染[3-5]。另有資料顯示圍生期感染HBV的患者，大部分會進(jìn)展為慢性肝炎，其免疫耐受期可持續(xù)幾年至幾十年不等[6-7]。

病理改變：只有少部分免疫耐受期慢性HBV感染者肝臟無炎癥、壞死和纖維化改變，絕大部分存在輕度炎癥反應(yīng)和輕度纖維化，而且有極少部分患者出現(xiàn)嚴(yán)重的纖維化（S3～S4），所以ALT水平與肝臟組織學(xué)改變并不完全平行，也不能全面表達(dá)肝臟損傷程度。最新資料表明免疫耐受期與HBV感染非活動狀態(tài)患者，肝臟炎癥活動度為G0者，僅占10%～20%，肝小葉及匯管區(qū)均未見或僅有少許炎癥細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)與肝實質(zhì)交界處無炎癥表現(xiàn)，匯管區(qū)無明顯擴大，無明顯纖維組織增生。肝臟炎癥活動度為G1者，占40%～60%，顯示肝組織匯管區(qū)及小葉內(nèi)均有少量炎細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)周圍輕度或局灶界面炎，匯管區(qū)輕微擴大，輕度纖維組織增生（S1）。肝臟炎癥活動度為G2者，大約占20%，纖維化程度S1～S2。中度以上炎癥者（＞G2）僅占5%左右[5-6]，纖維化程度一般較輕（S1～S2），明顯纖維化（S3）或者肝硬化者（S4）極少。

據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報道，HBV健康攜帶者往往無明顯癥狀、轉(zhuǎn)氨酶處于正常范圍內(nèi)，但是其組織病理學(xué)顯示肝臟有不同程度炎癥細(xì)胞浸潤、點灶狀壞死以及纖維化，但是這些報道材料、研究樣本幾乎都包含了免疫耐受期和非（低）活動復(fù)制期的患者。非（低）活動復(fù)制期患者基本上都經(jīng)歷過不同程度的或者反復(fù)幾次的病毒清除過程，在這個時期癥狀輕微可能不被覺察而無臨床表現(xiàn)，許多患者不清楚肝功能是否出現(xiàn)過異常。由于病毒免疫清除過程中不可避免地造成肝組織損傷，繼而以纖維化的方式修復(fù)壞死組織，造成肝臟程度不等的纖維化，而免疫耐受期患者沒有經(jīng)歷過免疫清除過程，可推測其發(fā)生纖維化的比例和程度會明顯降低[7]。

免疫組化檢查：免疫耐受期肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg主要表達(dá)方式為細(xì)胞漿內(nèi)的包涵體型，部分為細(xì)胞漿型，少部分有細(xì)胞膜表達(dá)。HBcAg以細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)為主，也有極少數(shù)出現(xiàn)在細(xì)胞核膜或者細(xì)胞核周邊。免疫耐受期、免疫清除期及非活動性HBV攜帶狀態(tài)的患者，其HBsAg陽性表達(dá)率未發(fā)現(xiàn)有明顯不同，而HBcAg陽性表達(dá)率免疫耐受期則顯著高于免疫清除期或非活動HBV攜帶狀態(tài)患者。免疫耐受期HBV感染者肝內(nèi)大多高表達(dá)HBcAg，以細(xì)胞核表達(dá)為主。HBcAg感染的肝細(xì)胞是細(xì)胞免疫效應(yīng)攻擊的靶細(xì)胞，當(dāng)HBcAg局限封閉于細(xì)胞核內(nèi)，無法成為受攻擊的靶抗原，故而難以有效激發(fā)T細(xì)胞的免疫反應(yīng)。當(dāng)肝細(xì)胞溶解后HBcAg就能直接釋放到血液中，故可用其直接反映肝細(xì)胞受損傷和病變的程度。

2 HBV感染免疫耐受期機制

肝臟耐受現(xiàn)象在很早以前就被人們認(rèn)識了。早在1969年，Calne等就發(fā)現(xiàn)在一些物種中不具有組織相容性的肝臟移植物在不應(yīng)用免疫抑制劑的情況下，就能夠自發(fā)地被接受?；旧辖】党扇耍邆渫晟频募?xì)胞免疫功能，HBV感染后能夠準(zhǔn)確無誤地清除病毒，出現(xiàn)不同程度的肝損害。HBV感染轉(zhuǎn)歸主要有兩個因素：一是病毒因素，病毒隱伏在人體的免疫特赦之處，能夠躲避正常機體的免疫監(jiān)視，引發(fā)慢性持續(xù)性的感染；另外就是宿主自身因素，成人免疫功能有缺陷和嬰兒免疫機制發(fā)育還不完善，感染HBV后就容易出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象。其中，宿主自身比病毒因素顯得更為重要[8-9]。肝內(nèi)免疫細(xì)胞包括肝竇內(nèi)質(zhì)細(xì)胞（LSECs）、肝星形細(xì)胞（HSCs）、庫普弗細(xì)胞（KCs）和淋巴細(xì)胞等，其中淋巴細(xì)胞占16％～22％，包括TCRαβ+與γδ+T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、自然殺傷性T細(xì)胞（NKT 細(xì)胞）和DCs等。HSCs促使T淋巴細(xì)胞凋亡是通過酪氨酸磷酸化信號通路水平76KDa蛋白的變化來實現(xiàn)的，證實了HSCs也是特異性免疫耐受細(xì)胞之一，與肝臟中的樹突狀細(xì)胞（DCs）、KCs、LSECs等肝非實質(zhì)細(xì)胞一樣，參與調(diào)節(jié)肝臟移植的外周特異性免疫耐受[10-11]。

2.1 LSECs

LSECs是微血管內(nèi)皮細(xì)胞，與其他大血管內(nèi)皮細(xì)胞及其他器官的微血管內(nèi)皮細(xì)胞相比較具有獨特的表型。LSECs在肝內(nèi)的含量十分豐富，約占肝內(nèi)非實質(zhì)細(xì)胞的50%。LSECs是有孔內(nèi)皮，其上有許多直徑約為100 nm的小孔，這些小孔聚集成簇，構(gòu)成篩板。另外，LSECs缺乏典型的基底膜，其下層為疏松基質(zhì)構(gòu)成的Disse間隙。這些特點可能與其活躍的吞噬細(xì)胞外基質(zhì)（如透明質(zhì)酸）的能力有關(guān)，因為在干擾了LSECs對透明質(zhì)酸攝取能力之后，LSECs上的小孔消失了，同時其基底膜也變得完整了[6]。LSECs被認(rèn)為是一種獨一無二的器官常住的抗原提呈細(xì)胞（APCs），原因：一是位置，LSECs位于肝內(nèi)網(wǎng)狀的血管網(wǎng)內(nèi)，可直接與血液中的細(xì)胞發(fā)生接觸；流經(jīng)肝的血流量很大，但在肝血竇內(nèi)的血流卻非常緩慢，甚至可有暫時的停滯，故這一獨特的位置可以使LSECs能夠與血液中的細(xì)胞頻繁而充分地接觸。二是功能，LSECs具有強大的清道夫功能和抗原提呈能力，它可以在非淋巴組織內(nèi)即肝臟局部活化原始T細(xì)胞。另外，它還可以捕獲T細(xì)胞并誘導(dǎo)其在肝內(nèi)發(fā)生凋亡。這些都是其他APCs所不具有的特性[10]。

2.2 肝內(nèi)淋巴細(xì)胞

肝中富含大量淋巴細(xì)胞群、巨噬細(xì)胞群及專職的APCs， 其中APCs包括樹突狀細(xì)胞（DCs）、血管內(nèi)皮細(xì)胞及LSECs。研究表明APCs是通過誘導(dǎo)凋亡等機制，引起T淋巴細(xì)胞免疫耐受的丟失。肝內(nèi)的非實質(zhì)細(xì)胞-淋巴細(xì)胞發(fā)揮了非常關(guān)鍵的作用，并且具有自身鮮明的生物學(xué)特點。人體特異性抗HBV免疫反應(yīng)缺乏或者不足導(dǎo)致HBV免疫耐受的發(fā)生，其主要原因是特異性T細(xì)胞功能低下。研究發(fā)現(xiàn)，肝臟在正常情況下存在較多的的淋巴細(xì)胞儲備，其中重要的是CD8+T和CD4+T細(xì)胞，都具有自身特殊的活性表位。血液中CD4+CD25+T細(xì)胞數(shù)量，HBV慢性感染患者明顯高于健康人群。清除病毒主要依靠CD8+T細(xì)胞，而CD4+T細(xì)胞則促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的成熟，有利于其功能的發(fā)揮?？梢酝茢郈D4+CD25+T細(xì)胞是HBV慢性感染患者出現(xiàn)免疫耐受原因之一[11]。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可能是：在體外通過細(xì)胞間的接觸依賴機制，在體內(nèi)基本依靠抑制性細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫功能，比如TGF-β等因子會受到免疫強度和調(diào)節(jié)位點調(diào)控。還可與APCs聯(lián)合調(diào)控機體免疫。

NKT 細(xì)胞是一種同時具有自然殺傷細(xì)胞（NK 細(xì)胞）和 T 細(xì)胞部分表型及功能的細(xì)胞亞群。它們能將固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答連接起來，識別 CD1d-糖脂抗原，分泌細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)機體的免疫應(yīng)答。

2.3 DCs

DCs作為一種非常重要的APCs，對初始型T細(xì)胞的激活起著獨特的作用。從數(shù)量上看，僅占外周單個核細(xì)胞的0.5％，分布于全身各處。DCs有不同的亞型、不同的分子表達(dá)，因此DCs在發(fā)育的不同階段與T細(xì)胞接觸能夠誘導(dǎo)分化出不同的形態(tài)性能的T細(xì)胞。來自國內(nèi)外的報道表明DCs除了對外來抗原發(fā)揮免疫反應(yīng)外，還對機體自身抗原有免疫耐受作用。其免疫耐受功能體現(xiàn)在免疫偏離、誘導(dǎo)T細(xì)胞無免疫應(yīng)答以及促進(jìn)T細(xì)胞凋亡等。雖然DCs在中樞免疫和周圍免疫耐受中都發(fā)揮著主要作用，但免疫耐受是如何發(fā)生或誘發(fā)的，其分子確切機制仍在研究之中[12]。

掃描電子顯微鏡圖像表明DCs間有大小不等的間隙，非常有利于初始T細(xì)胞和激活T細(xì)胞與肝細(xì)胞直接接觸。DCs在遷移過程中由幼稚向成熟狀態(tài)轉(zhuǎn)化，其攝入、處理和加工抗原的能力在減弱，但抗原提呈能力逐步增強。隨著DCs遷移和成熟，它不再表達(dá)趨化因子受體CCR-1和CCR-5，而表達(dá)CCR-7。

2.4 KCs

KCs是定居在肝內(nèi)的巨噬細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，有許多板狀或絲狀偽足，細(xì)胞表面有許多皺褶和微絨毛，并有較厚的糖衣。細(xì)胞常以其偽足附于內(nèi)皮細(xì)胞上或穿過內(nèi)皮細(xì)胞窗孔或細(xì)胞間隙伸入竇周隙內(nèi)。胞質(zhì)內(nèi)溶酶體甚多，并常見吞噬體和殘余體。具有變形運動和活躍的吞飲與吞噬能力，構(gòu)成機體一道重要防線，尤其在吞噬清除從胃腸進(jìn)入門靜脈的細(xì)菌、病毒和異物方面起關(guān)鍵作用。肝巨噬細(xì)胞還可監(jiān)視、抑制和殺傷體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，尤其是肝癌細(xì)胞，并能吞噬和清除衰老、破碎的紅細(xì)胞和血小板等。重要的是，肝巨噬細(xì)胞還有處理和傳遞抗原、誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖及參與調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答等作用，與肝臟中的LSECs、DCs等肝非實質(zhì)細(xì)胞一樣參與調(diào)節(jié)肝臟外周特異性免疫耐受。

據(jù)國外研究發(fā)現(xiàn)[13]， KCs是肝臟本身固有免疫系統(tǒng)主要組成部分之一， 不但參與人體對病毒感染的抵抗和防御，還對HBV的免疫耐受起著重要作用。在乙肝慢性感染的初期階段， 檢測表明人體本身的免疫系統(tǒng)就出現(xiàn)了免疫耐受狀態(tài)，因為沒有檢查出人體抵御HBV感染的有效指標(biāo)。迄今為止雖然對HBV慢性感染的免疫耐受機制有了許多進(jìn)展，但是還有一些問題有待解決。

病毒感染免疫檢驗分析:乙肝病毒感染者所生新生兒的免疫預(yù)防

我國是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高流行區(qū)，母嬰傳播、血液和體液傳播、密切接觸是乙型肝炎傳播的三大途徑。在我國，母嬰傳播是最主要的傳播途徑。婦女感染HBV對其本人和嬰兒均有影響。如果不采取有效的預(yù)防措施，HBV感染者(包括攜帶者和患者)所生的新生兒約有90％會受到乙肝病毒的感染，其中的90％-95％將成為慢性HBV攜帶者。因此，必須加強對所有妊娠婦女早期乙肝表面抗原(HBsAS)的篩查，以確定孕婦是否患有乙肝或攜帶HBV。一旦孕婦被確定感染了HBV，就應(yīng)在早期采取阻斷母嬰傳播的預(yù)防措施，包括產(chǎn)程中及新生兒出生后的預(yù)防措施，特別是對新生兒的免疫預(yù)防不可忽視。

對于HBV感染者所生新生兒的免疫預(yù)防措施，一般采取以下兩種方式：一是通過注射乙肝表面抗體(抗HBs)的方式進(jìn)行被動免疫，以達(dá)到預(yù)防乙肝的目的。其優(yōu)點是，可以很快中和進(jìn)入新生兒體內(nèi)游離的HBV，從而減少或避免HBV對新生兒的感染和傳播。二是通過注射HBsAg的方式進(jìn)行主動免疫，以達(dá)到更為積極和持久的預(yù)防效果。其優(yōu)點是，可促使新生兒體內(nèi)產(chǎn)生抗HBs，直接對抗HBV，達(dá)到阻斷HBV傳播的良好作用。

目前醫(yī)學(xué)專家的建議是，無論新生兒出生時是否受到HBV的感染，都應(yīng)對其進(jìn)行乙型肝炎的預(yù)防和隔離。對于HBV感染者所生的新生兒應(yīng)當(dāng)采取主動免疫和被動免疫相結(jié)合的方式來進(jìn)行保護(hù)。

被動免疫方式：①感染HBV的孕婦從妊娠3個月起開始注射抗HBs，每月一次，每次注射高效價乙肝免疫球蛋白200國際單位，以降低其體內(nèi)的HBV含量，從而減少對胎兒傳播的威脅。②在新生兒出生后，要盡可能在最短的時間內(nèi)(不超過24小時)為其肌肉注射高效價乙肝免疫球蛋白，劑量為0．05~0．07毫升／公斤，2周后重復(fù)接種一次。

主動免疫方式：即新生兒在出生后的24小時內(nèi)接種乙肝疫苗，劑量為10微克，按0、1、6個月的程序，單用疫苗注射3次。這種方式的免疫效果可維持5年或更長。

總之，對HBV感染者所生的新生兒均應(yīng)及時進(jìn)行免疫預(yù)防，最好是把主動免疫和被動免疫兩種方式結(jié)合起來應(yīng)用。臨床觀察表明，乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗的聯(lián)合使用對乙型肝炎母嬰傳播的阻斷率可達(dá)90％左右，且注射時間越早、執(zhí)行程序越嚴(yán)格，效果越好。

病毒感染免疫檢驗分析:關(guān)于病毒感染免疫檢驗的進(jìn)展分析

【摘要】 因各種病毒感染而引起的疾病是臨床常見病。由于病毒寄生在細(xì)胞內(nèi)，且繁殖速度極快，變異機率極高，因此，如果按照常規(guī)方法診斷，并不能滿足臨床診斷的需求。而免疫檢驗法不但能對病毒感染做出相對準(zhǔn)確的診斷，在預(yù)防接種、發(fā)病機理、免疫性治療等方面也有重要意義。本文將主要對免疫檢驗法應(yīng)用于病毒感染中的進(jìn)展進(jìn)行分析，以促進(jìn)病毒感染免疫檢驗技術(shù)的發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】 病毒感染免疫；檢驗；進(jìn)展

隨著醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展，傳統(tǒng)的常規(guī)病毒檢驗方法已漸漸難以滿足各種病毒感染的檢驗需求，免疫檢驗法應(yīng)運而生。免疫檢驗法是在機體感染病毒后，通過所引起的免疫應(yīng)答機理，根據(jù)免疫細(xì)胞的數(shù)量和發(fā)揮的功能來對病情進(jìn)行判斷。免疫檢驗還能較快的檢測出待檢標(biāo)本中的病毒，并根據(jù)抗體產(chǎn)生的速度、類型和濃度對患者進(jìn)行早期的病毒感染診斷，其作用不容忽視。

1 病毒感染引起的免疫性損害及機制

病毒是一種比較微小的生物，主要依靠宿主細(xì)胞而生存，其對宿主細(xì)胞的功能有一定損害作用，因此，會對機體的免疫功能產(chǎn)生抑制作用，從而會使機體的免疫病理發(fā)生改變。免疫抑制指的是通過感染免疫細(xì)胞而使免疫分子的表達(dá)下調(diào)，從而使免疫分子在血清中的有效濃度得到一定降低，進(jìn)而使機體的免疫應(yīng)答反應(yīng)有所減緩。免疫損害指機體因病毒感染而出現(xiàn)病理性免疫應(yīng)答，從而使非免疫應(yīng)答組織或器官出現(xiàn)免疫損傷，進(jìn)而對組織或器官受損。

2 早期病毒感染的免疫檢驗方法

2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗 酶聯(lián)免疫吸附試驗又叫ELISA試驗，它能將免疫反應(yīng)的特異性和催化作用相結(jié)合進(jìn)行分析，并將已知的抗體或抗原吸附在反應(yīng)平板上，再進(jìn)行酶標(biāo)抗原抗體反應(yīng)的一種試驗?zāi)Ｊ絒1]。在病毒檢驗方面，酶聯(lián)免疫吸附試驗是檢驗藍(lán)舌病、豬偽狂犬病等病癥的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗的常用方法是雙抗夾心法和間接吸附試驗，其中，雙抗夾心法是早期病毒感染抗原抗體檢驗中最常用的方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗將酶的化學(xué)反應(yīng)與抗原的抗體反應(yīng)相關(guān)特異性結(jié)合，進(jìn)而促使ELISA試驗變成一種敏感且特異的免疫檢測方法。

2.2 免疫熒光試驗 免疫熒光試驗是一項由熒光抗原法和熒光抗體法組成的免疫標(biāo)記技術(shù)。由于熒光素能與已知抗體結(jié)合形成熒光抗體，并將反應(yīng)后的熒光抗體置于熒光顯微鏡下觀察，根據(jù)散發(fā)出的熒光，對待檢標(biāo)本中的抗原進(jìn)行鑒定和判斷[2]。還可以采用免疫熒光試驗將熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合，對抗體進(jìn)行檢測和定位。免疫熒光試驗具有特異性、高效性和靈敏性，但檢測結(jié)果不夠客觀，檢驗流程也過于復(fù)雜。

2.3 放射免疫技術(shù) 反射免疫技術(shù)又叫RIA技術(shù)，最早源自于1960年德國科學(xué)家創(chuàng)造的放射免疫分析技術(shù)，這種技術(shù)能讓抗體與被同位素標(biāo)記和未被標(biāo)記的抗原產(chǎn)生競爭性抑制，是一項體外微量性分析技術(shù)。放射免疫技術(shù)具有特異性、簡便性、靈敏度高、取樣數(shù)量少等特點，現(xiàn)階段主要用于對乙型肝炎病毒的鑒定與判斷。但由于檢測時會產(chǎn)生放射性物質(zhì)，會對研究者身體帶來一定的影，且有可能出現(xiàn)假陽性的檢測結(jié)果，還容易受外界環(huán)境因素影響而使得檢測結(jié)果出現(xiàn)異常。

2.4 血細(xì)胞凝集試驗 血細(xì)胞凝集試驗主要針對在當(dāng)機體感染病毒后，會讓病毒表面的抗原與紅細(xì)胞表面的抗原受體結(jié)合，血細(xì)胞沉降率增加，形成血細(xì)胞凝集現(xiàn)象。這種試驗方法能對病毒進(jìn)行定性定量的檢測，如果機體內(nèi)存在病毒抗體，就會抑制因病毒而引起的血細(xì)胞凝集現(xiàn)象[3]。這種試驗方法通常用于檢測梅毒螺旋體等病毒，這種方法目前只能確診梅毒患者，對其他病毒感染尚無法確診。此外，研究人員還根據(jù)病毒凝集紅細(xì)胞的能力和對相應(yīng)抗體的抑制特性設(shè)計出了血凝抑制試驗。

2.5 中和實驗法 又稱標(biāo)準(zhǔn)試驗法，主要包括固定病毒-血清稀釋法和固定血清-稀釋病毒法兩種。這種方法主要檢測病毒的感染力，以病毒受到血清中和后的殘留感染力為依據(jù)，來對該免疫血清抑制病毒擴散的能力進(jìn)行判斷。臨床上常用它來分析堅定病毒的類型和病毒的抗原性等。

3 新型病毒感染免疫檢驗方法

3.1 重組免疫試驗 重組免疫試驗主要對HIV抗體和HCV抗體進(jìn)行檢測。與酶聯(lián)免疫吸附試驗方法相比，重組免疫試驗?zāi)軐⒏鞣N橫線式抗原結(jié)合在硝酸或纖維素膜的橫條上，并置于長條凹槽反應(yīng)盤中，加底物顯色后就能顯示血清中存在的針對性抗原。同時，這種試驗方法也能用于口蹄疫病毒的臨床檢測[4]。

3.2 膠體金技術(shù) 以膠體金作為標(biāo)志物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)中的一種新型免疫檢驗技術(shù)，具有特異性、簡便性、安全性等特點。膠體金是一種能在還原劑作用下聚集形成較小金顆粒，并能與蛋白質(zhì)結(jié)的生物藥性，它還能與其他多種生物分子結(jié)合，因此多用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)等領(lǐng)域，以及對HIV的篩查和人體血清甲胎蛋白的檢驗。

3.3 發(fā)光免疫試驗 發(fā)光免疫試驗是一種將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)與機體免疫反應(yīng)相結(jié)合，并通過光反應(yīng)來表示待測物質(zhì)的免疫成分和濃度的新型檢驗方法。這種方法可以利用放光劑作為標(biāo)記物，保證檢驗在安全可行的環(huán)境中進(jìn)行，是一種無害無毒的安全檢測方法。同時，發(fā)光免疫試驗?zāi)茉谳^短的時間內(nèi)完成對病毒的檢驗，在一定程度上滿足了臨床檢測的需要，在現(xiàn)代化病毒檢測中有良好的發(fā)展前景。

4 結(jié) 語

隨著科技的發(fā)展，傳統(tǒng)的病毒感染檢驗技術(shù)正在被眾多新型檢驗技術(shù)取代，越來越多安全、高效、快捷的檢驗技術(shù)被試驗人員接受。同時，在對病毒感染進(jìn)行檢驗的過程中，仍存在著如測量方法不當(dāng)、試驗流程混亂、濃度超標(biāo)、標(biāo)本選取時間及方法不當(dāng)?shù)葐栴}，都不同程度地增大了病毒感染檢驗的難度。因此，在病毒檢驗過程中，要采用更高效、更安全、更簡便的新興檢驗方法，以更好地促進(jìn)病毒檢驗技術(shù)的發(fā)展，也能更好地為病毒感染檢驗工作服務(wù)。

病毒感染免疫檢驗分析:淺析人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡病例的特點

【摘要】目的對人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡病例的特點進(jìn)行分析。方法資料選取2007年3月――2012年3月本州人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡的病例56例作為研究組，并收集本州同期非免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡病例56例作為對照組，對兩組病例進(jìn)行分析。結(jié)果研究組和對照組就結(jié)核桿菌、肺外結(jié)核、X胸片分析以及CD+4細(xì)胞計數(shù)進(jìn)行比較，比較有差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

【關(guān)鍵詞】人類免疫缺陷病毒感染；結(jié)核??；死亡

我國人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡率不斷增加，本文主要探索人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡病例的特點。

1資料與方法

1.1一般資料與分組資料選自2007年3月――2012年3月在本州住院期間確診為結(jié)核病且病死的病例112例，將其分為研究組和對照組，人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病作為研究組，人類非免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)合病作為對照組。其中研究組患者56例，男女比例為33：23，患者年齡為24-65歲，平均年齡為（39±3.83）歲。對照組患者56例，男女比例為35：21，患者年齡為25-69歲，平均年齡為（40±3.49）歲。

1.2檢測及分析方法研究組和對照組的患者進(jìn)行咳痰取樣，并將痰標(biāo)本涂片進(jìn)行抗酸桿菌檢查，采用羅氏培養(yǎng)基對結(jié)核桿菌進(jìn)行培養(yǎng)。并對研究組和對照組患者是否發(fā)生肺外結(jié)核、胸部X線片檢查中病灶的范圍，肺內(nèi)空洞以及CD+4細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行分析。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析處理，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，當(dāng)P

2結(jié)果

2.1結(jié)核桿菌檢查情況研究組和對照組痰涂片抗酸桿菌比較中，研究組痰涂片抗酸桿菌陽性率明顯低于對照組為26.79%，對照組陽性率為46.42%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2.2肺外結(jié)核情況研究組和對照組肺外結(jié)核對照比較，研究組肺外結(jié)核占34例，對照組占27例，且研究組肺外結(jié)核發(fā)生率明顯高于對照組肺外結(jié)核的發(fā)生率為58.93%，對照組肺外結(jié)核的發(fā)生率為46.42%，比較有差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2.3X線片影像學(xué)分析研究組和對照組胸部X線片的檢查過程中，研究組病灶>50%肺野病明顯高于對照組為53.57%，對照組為42.85%，比較有差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

3結(jié)論

我國人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡的病例隨年增加，結(jié)核病是免疫缺陷病毒/艾滋病中最有機會感染的并發(fā)癥，而且免疫缺陷病毒/艾滋病是導(dǎo)致結(jié)核病患者死亡最為重要的因素，人類免疫缺陷病毒感染的陽性患者并發(fā)結(jié)核病的病死率是單純結(jié)核病患者病死率的4倍，不進(jìn)行任何治療時，病死率數(shù)月內(nèi)達(dá)90%-95%[1]。

本次研究表明，研究組與對照組比較中，研究組人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡病例具有的臨床特點：①痰菌陽性的檢出率相對非免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病死亡病例的要低；②肺外結(jié)核及全身散播的機會多；③肺內(nèi)病灶比較廣泛，肺內(nèi)空洞的形成較低；④CD+4細(xì)胞數(shù)量逐漸減少；其減少的程度預(yù)示著人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病患者的生存力。

綜上所述，人類免疫缺陷病毒感染患者的免疫力低，導(dǎo)致各種機會性的感染增加，因此在檢查結(jié)核桿菌的過程中還應(yīng)當(dāng)注意其他的真菌、細(xì)菌的檢查與診斷。通過探索人類免疫缺陷病毒感染并發(fā)結(jié)核病患者的臨床特征能夠提升治愈率，降低病死率。