序論：寫作是一種深度的自我表達。它要求我們深入探索自己的思想和情感，挖掘那些隱藏在內(nèi)心深處的真相，好投稿為您帶來了七篇自動化免疫分析范文，愿它們成為您寫作過程中的靈感催化劑，助力您的創(chuàng)作。

篇(1)

在醫(yī)學高速發(fā)展的今天，隨著先進技術(shù)的不斷引入，臨床醫(yī)學檢驗獲得日新月異的發(fā)展：高速度生化分析儀的裝備，解決不斷增長的檢測量的壓力；更靈敏的化學發(fā)光技術(shù)及后續(xù)研發(fā)投入，深刻地影響和拓展著免疫學檢測領(lǐng)域的廣度和深度；分子生物學技術(shù)、基因芯片、蛋白芯片技術(shù)的發(fā)展，必將會引領(lǐng)臨床醫(yī)學檢驗的全新變革，使得個性化的疾病診斷、治療成為現(xiàn)實。

全實驗室自動化（total laboratory automation，TLA）又稱全程自動化（front to end automation） 是將臨床實驗室中各種獨立的自動化儀器以特殊的物流傳送設(shè)備串聯(lián)起來，在信息流的主導控制下，構(gòu)成流水線作業(yè)的組合，形成大規(guī)模的全實驗室常規(guī)檢驗過程的自動化，國內(nèi)也有稱臨床實驗室自動化檢驗流水線。

基本結(jié)構(gòu)：

1.標本運輸系統(tǒng)（sample transportation system， STS）

1.1傳輸系統(tǒng)負責將樣品從一個模塊傳遞到另一個模塊。

1.2現(xiàn)有的產(chǎn)品可分為兩大類： 智能化傳輸帶和智能自動機械臂，每一類中又有多種規(guī)格。

2.標本前處理系統(tǒng)（sample pre-analytical moudular system， PAM）

前處理工作站包括：

1.樣品分類

2. 自動裝載和樣本離心

3. 樣本去蓋

4. 樣本再分注及標記

3.自動化分析儀（automated analyzer）

4.分析后處理輸出系統(tǒng)

輸出緩沖模塊包括出口模塊和標本儲存接收緩沖區(qū)，出口模塊用于接收需人工復檢標本以及離心完畢的非在線檢測標本。標本儲存接收緩沖區(qū)可進行在線自動復檢，當LIS審核報告時，確認某一項目復檢后，即向該模塊發(fā)出復檢指令，將需要復檢的標本送入復查回路，并送至分析系統(tǒng)進行復檢。

5.臨床實驗室信息系統(tǒng)， （laboratory information system， LIS）

實時完成從醫(yī)院信息系統(tǒng)（hospital information system，HIS）下載患者資料、試驗請求信息、上傳標本在各模塊的狀態(tài)、標本架號位置、分析結(jié)果、通訊情況等。

全實驗室自動化（TLA）是將眾多模塊分析系統(tǒng)整合成一個實現(xiàn)對標本處理、傳送、分析、數(shù)據(jù)處理和分析過程的全自動化。標本在TLA可完成臨床化學、免疫學、血液學等亞專業(yè)的任一項目檢測。全實驗室自動化包括：自動化標本處理、標本自動傳送和分選至相應(yīng)的分析工作站、自動分析、利用規(guī)范的操作系統(tǒng)軟件對分析結(jié)果進行審核、儲存已分析的標本并能隨時對儲存標本重新進行測試。

實驗室自動化流水線作為臨床檢驗醫(yī)學發(fā)展的必然趨勢，勢必對實驗室的管理和發(fā)展產(chǎn)生深遠影響。它的引入不僅是提高工作效率，減少實驗室運行成本，更重要的是建立一個實驗室標準操作平臺，提高了實驗室管理水平和服務(wù)質(zhì)量，以高質(zhì)量的檢測報告更好地服務(wù)患者，服務(wù)臨床科室，服務(wù)于醫(yī)院的長遠發(fā)展

參考文獻：

[1] Markin RS，Whalen SA. Laboratory automation： trajectory， technology， and tactics.Clinical Chemistry，2000，05.

[2]Sasaki M，Kageoka T，Ogura Clinica Chimica Acta，1998，02.

[3]Hoffmann GE.Concepts for the third generation of laboratory systems.Clinica Chimica Acta，1998，02.

篇(2)

【關(guān)鍵詞】 梅毒螺旋體； 血清學檢測； 化學發(fā)光； 核酸檢測

梅毒是國家規(guī)定的血液篩查的項目之一，在乙肝、丙肝、艾滋三個項目已經(jīng)開始采用核酸篩查血液時，梅毒檢測現(xiàn)階段有哪些更好的方法可以用在血液篩查中提高血液篩查效果呢？最近20多年，隨著科學技術(shù)的迅速發(fā)展，梅毒的檢測方法與技術(shù)也取得了長足進步，不僅表現(xiàn)在檢測試劑的靈敏度和特異性不斷提高上，還表現(xiàn)在化學發(fā)光技術(shù)與核酸檢測技術(shù)（NAT）的引入。筆者現(xiàn)就梅毒螺旋體的實驗室檢測技術(shù)做一評述。

1使用類脂質(zhì)抗原的梅毒螺旋體

血清學檢測技術(shù)＼[1＼]此類試驗主要包括VDRL、USR、RPR、TRUST等，其中VDRL和USR需要使用顯微鏡觀察結(jié)果，RPR和TRUST用肉眼觀察結(jié)果。

1.1VDRL（性病研究實驗室試驗）

20世紀50、60年代最為常用的梅毒血清學試驗。反應(yīng)素（梅毒螺旋體破壞機體組織過程中，機體產(chǎn)生的相應(yīng)抗體）與抗原（從牛心中提取的心磷脂和從雞蛋黃中提取的卵磷脂及膽固醇等有效成分）發(fā)生反應(yīng)，試驗時的搖動，使得反應(yīng)素與抗原反應(yīng)，形成的顆?；ハ嗾掣?，形成顯微鏡下可見的凝集沉淀，即為陽性。VDRL試驗有幾個缺點，即抗原需要每日配置；血清標本需加熱滅活；要在顯微鏡下觀察結(jié)果。因此，后來又推出了改良的USR和RPR。

1.2USR（不加熱血清反應(yīng)素試驗）

本方法對VDRL抗原進行了改良，即將VDRL抗原稀釋后，再將抗原懸液離心，然后在沉淀物中加入含有EDTA-Na2即氯化膽堿等的緩沖液。EDTA可使抗原半年內(nèi)不變性，氯化膽堿可以滅活補體，這樣就無需每天配置抗原，也無需血清加熱滅活，但仍需顯微鏡下觀察結(jié)果。

1.3RPR（快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗）

本方法是在USR抗原的基礎(chǔ)上，加入特制的活性炭顆粒，這樣，抗原抗體反應(yīng)呈現(xiàn)出黑色的凝集顆粒，在白色紙片上，肉眼易于觀察。

1.4TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗）

本方法是在前述抗原試劑中加入了甲苯胺紅。甲苯胺紅是一種顆粒均勻的化學染料，陽性結(jié)果呈現(xiàn)出紅色的凝集顆粒，更加便于觀察。目前，用于梅毒篩查的常用方法是TRUST和RPR。

上述4種試驗都使用類脂質(zhì)抗原，采用凝集反應(yīng)方法測定，操作簡單快速，但4種方法的特異性較差。多種疾病如類風濕關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等，會出現(xiàn)生物學假陽性。有報道在沒有梅毒感染史的正常人群中上述實驗會有0.1%的陽性率。TRUST方法曾經(jīng)用于血液篩查，但從2000年起逐漸停用，取而代之的是靈敏度和特異性更高的酶免方法。

2使用密螺旋體抗原的梅毒螺旋體

血清學檢測技術(shù)此類試驗是梅毒特異性抗體檢測試驗，比較常用的有如下幾種。

2.1TPHA（梅毒螺旋體血球凝集試驗）

本實驗是以梅毒螺旋體作為抗原的間接血細胞凝集試驗。所用抗原為將梅毒螺旋體nichols株經(jīng)超聲裂解后得到的可溶性抗原成分，用其致敏火雞或羊紅細胞，然后用Reiter株（無毒株）制成的吸收劑稀釋血清，吸收血清中的非特異性抗體。經(jīng)過上述處理后TPHA試劑的特異性和敏感性均較高。本試驗無需特殊設(shè)備，尚未實現(xiàn)自動化檢測，試驗中可發(fā)生自凝現(xiàn)象，需引起重視。由于TPHA試劑成本較高，且不能實現(xiàn)批量自動化檢測，因此本方法暫不適合用于血液篩查。

2.2TPPA（梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗）

本實驗原理與TPHA類似，其所用凝集顆粒為明膠顆粒而非紅細胞。TPPA在2002年為美國疾病預防控制中心推薦用作梅毒確證試驗，其靈敏度和特異性均較高，但試劑價格較貴。據(jù)文獻報道，TPPA與ELISA檢測結(jié)果之間符合性很好＼[2，3＼]。

有報道稱TPPA試驗可以實現(xiàn)自動化檢測＼[2＼]，但未見TPPA試驗自動化的明確報道。TPPA的自動化檢測也是筆者科研立項的題目。如果TPPA可以實現(xiàn)自動化檢測，那本方法是很適宜用作血液篩查的。應(yīng)用TPPA作為血液篩查方法其意義不僅在于它是一項確認試驗，還在于進行獻血者告之時給予肯定的結(jié)果，從而避免引起各種糾紛。

2.3ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）

本方法所用試劑經(jīng)過十余年的發(fā)展，現(xiàn)采用基因工程的方法，得到高純度的梅毒螺旋體外膜蛋白作為抗原，大大提高了試劑的特異性。用于檢測TP的IgG和IgM抗體。大量的試驗表明其與TPPA，TPHA有較好的相關(guān)性＼[2，3＼]。本試驗操作簡單，可實現(xiàn)自動化檢測，是梅毒血清學診斷試驗的首選方法?，F(xiàn)階段血液篩查要求使用兩個不同廠家生產(chǎn)的試劑進行篩查，本方法應(yīng)用已經(jīng)十分成熟。

2.4金標法

本法是以基因工程生產(chǎn)重組純化的TP外膜蛋白，采用膠體金標法和免疫層析技術(shù)進行TP抗體的檢測，該方法快速，簡便，但有假陽性的結(jié)果，需做進一步的確認試驗。本方法主要用于街頭血液TP的快速篩查。

2.5FTA-ABS（熒光螺旋體抗體吸附試驗）

本試驗為定性試驗，是公認的“經(jīng)典”血清學試驗。它是將Nichols株抗原涂在玻片上，然后用Reiter株制成吸收劑加入待測血清中，30min后將混合血清加在涂有抗原的玻片上37℃孵育30min，然后用PBS緩沖液沖洗晾干，加上熒光素標記的抗人IgG，37℃孵育后沖洗晾干，最后用熒光顯微鏡觀察結(jié)果。由于本試驗需要熒光顯微鏡，以及不能進行自動化檢測，因而不適合應(yīng)用于血液篩查中。

2.6WB（蛋白印跡技術(shù)）

20世紀80年代蛋白印跡試驗逐漸發(fā)展起來，它是一種膜上免疫測定技術(shù)。首先將梅毒螺旋體Nichols株菌體細胞用超聲波破碎，再使用聚丙烯酰胺凝膠電泳將梅毒螺旋體各種抗原成分分開形成不同區(qū)帶，經(jīng)電轉(zhuǎn)印可將這些條帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上作為抗原，最后用酶標技術(shù)檢測病人血清中的相應(yīng)特異抗原。如果出現(xiàn)特異性區(qū)帶15.5KD和45KD，這時即可確診梅毒。這種方法通常作為篩查陽性標本的確認試驗。RPR， FTA-ABS，和TPHA，TPPA等試驗出現(xiàn)的假陽性，用本實驗檢測均為陰性，有研究表明本方法要優(yōu)于上述這些方法，是一種很不錯的確認試驗。

3化學發(fā)光免疫分析法

本法是化學發(fā)光法和免疫分析法結(jié)合的產(chǎn)物，是將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，它采用化學發(fā)光反應(yīng)試劑標記抗原或抗體，等其與待測物經(jīng)過一系列反應(yīng)后，測定發(fā)光強度以確定待測物的含量。該方法廣泛用于各種抗原、抗體、酶、藥物等物質(zhì)的檢測，是一項最新的免疫測定技術(shù)＼[4＼]。在檢測梅毒抗體方面，三甲醫(yī)院臨床實驗室逐漸采用化學發(fā)光免疫分析儀進行檢測，在近幾年的文獻中多有報道，其結(jié)果與TPPA、ELISA等符合性較好＼[5，6＼]。由于其自動化程度高，檢測快速，靈敏度特異性與TPPA持平或更高＼[5＼]，因此在血液篩查檢測中也是一個很好的選擇，其唯一不足之處在于檢測成本較高。

4PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）

經(jīng)過持續(xù)不懈的努力，對于梅毒螺旋體的基因結(jié)構(gòu)已經(jīng)清楚＼[7＼]，是由1，138，006個堿基對組成的環(huán)狀DNA鏈，有1041個開放讀碼框架，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TP膜抗原有22種，內(nèi)鞭毛蛋白36種，其中外膜蛋白47KD蛋白和內(nèi)鞭毛37KD蛋白具有高度免疫原性。以下就常用PCR的方法做一介紹。

4.1常規(guī)PCR

常規(guī)PCR首先要選取適宜的靶基因進行擴增。早在1990年，國外有學者使用tmp基因作為靶基因來設(shè)計相應(yīng)引物，之后又曾嘗試過bmp、47Kda等基因，但效果均不理想。2000年時，經(jīng)研究比較發(fā)現(xiàn)，polA基因具有較高的特異性和敏感性＼[8＼]，隨后將其用于引物設(shè)計。經(jīng)過臨床試驗驗證，其敏感性和特異性達到95.8%和95.7%，效果顯著。常規(guī)PCR后期工作比較繁瑣，因其需要做凝膠電泳。本試驗需要重點控制的環(huán)節(jié)是防止擴增產(chǎn)物受到污染。

4.2多重PCR

本方法在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上進行了改進。在使用靶基因作為引物設(shè)計上采用了多個特異性抗原基因設(shè)計多個引物同時擴增幾條DN段。試驗的反應(yīng)原理、反應(yīng)試劑、操作過程都與常規(guī)PCR一樣。有學者應(yīng)用多重PCR檢測梅毒螺旋體感染者的標本后再與確認PCR比較，其一致率達99.3%，而且該方法很適合在常規(guī)實驗室使用＼[9＼]。

4.3實時熒光定量PCR＼[10＼]

本方法是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用對熒光信號積累的實時檢測來監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。Holland及其同事最早提出了TaqMan原理＼[11＼]。利用這一原理，設(shè)計出了TaqMan熒光探針，使用實時熒光PCR儀實時檢測熒光信號。在TaqMan熒光探針的基礎(chǔ)上，進一步又發(fā)展了MGB探針＼[12＼]。我國學者徐瑾等構(gòu)建了重組質(zhì)粒PMD18-T-TP，建立了利用MGB-Taqman探針的實時熒光定量PCR＼[13＼]。幾年之后，Leslie等使用改進的實時熒光定量PCR與血清學方法比較，結(jié)果Real-Time PCR的敏感性和特異性均較高。與常規(guī)PCR相比，實時熒光定量PCR不僅不需要電泳確證，因其采用閉管熒光檢測，還大大減少了假陽性。實時熒光定量PCR的過程自動化程度高，其高靈敏度和特異性也使其廣泛應(yīng)用于醫(yī)學檢測的各領(lǐng)域。

4.4巢式PCR

又稱二次PCR，也即進行兩次擴增。本方法首先用外引物進行第一輪PCR，利用第一次擴增的DNA序列內(nèi)部的一對引物再次擴增。有報道稱巢式PCR可檢測1.6fg的TP DNA，因此適用于檢測血清等標本中微量的梅毒螺旋體。多名學者設(shè)計試驗對巢式PCR與常規(guī)PCR、血清學方法進行比較＼[14＼]，實驗結(jié)果顯示巢式PCR與血清學方法無顯著性差異，但與常規(guī)PCR有顯著性差異。由于巢式PCR使用了兩對引物進行了兩次擴增，其敏感性和特異性均得到了增強，故可以作為血清學方法的補充用于梅毒螺旋體的診斷。

4.5逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）

本方法首先是提取目標細胞中總RNA，利用mRNA做為模板，反轉(zhuǎn)錄生成cDNA，然后將cDNA做為模板擴增，即可獲得目的基因。雖然檢測結(jié)果優(yōu)于常規(guī)PCR，但其操作較常規(guī)PCR繁雜，注意事項較多，故不利于推廣使用。

梅毒是一種由蒼白密螺旋體引起的傳染病，最近幾年發(fā)病率逐年上升，這種情況對輸血安全構(gòu)成了嚴重威脅。實驗室檢測梅毒的方法較多，梅毒研究中常使用WB、TPPA和PCR三種方法；臨床實驗室常用的方法有ELISA、TRUST、TPPA、化學發(fā)光法等＼[15＼]；血液篩查是使用不同廠家的兩種ELISA試劑進行。為了提高血液篩查水平，根據(jù)不同實驗的特點，建議在血液檢測中使用TPPA或化學發(fā)光法篩查梅毒，以便更好的保證輸血安全。

參考文獻

＼[1＼]李金明.臨床酶免疫測定技術(shù).北京：人民軍醫(yī)出版社，2005：220-223.

＼[2＼]趙艷梅，周子昱，曹紅榮，等.徐州市無償獻血者梅毒ELISA和TPPA檢測結(jié)果分析.臨床輸血與檢驗，2012，14（3）：255-257.

＼[3＼]王倫善，呂蓉，盛琪琪，等.梅毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗S/CO值與TPPA結(jié)果相關(guān)性研究.中國輸血雜志，2011，24（2）：126-127.

＼[4＼]林金明，趙利霞，王栩，等.化學發(fā)光免疫分析.北京：化學工業(yè)出版社，2008：9-12.

＼[5＼]魏壽忠，林桂花，陳依平，等.化學發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體的效果評價.國際檢驗醫(yī)學雜志，2012，33（11）：1351-1352.

＼[6＼]張旭東，馬艷華，周少聰，等.微粒子化學發(fā)光法和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗檢測梅毒抗體的一致性比較.武警醫(yī)學，2012，23（9）：756-757.

＼[7＼]Fraser CM，Norris SJ，Weinstock GM，et plete genome sequence of treponema pallidum，the syphilis spirochete. Science，1998，281（5375）：375-388

＼[8＼]Rodes B，H Liu，S Johnson，et al.Cloning and characterization of a gene polA coding for an unusual DNA polymerase Ⅰ from the obligate parasite Treponema pallidum.J Med Microbiol，2000（49）：657-667.

＼[9＼]Mclver CJ， Rismanton N，Smith C，et al.Multiplex PCR testing detected higher than expected rates of cervical Mycoplasmas，Ureaplasmas，Trichomonas and viral agents in sexually active Australian women .J Clin Microbiol，2009，47（5）：1358-1363.

＼[10＼]李金明.實時熒光PCR技術(shù).北京：人民軍醫(yī)出版社.2012：17-18.

＼[11＼]Holland PM，AbramsomRD，WatsonR，et al.Detection of spesific polymerase chain reaction product by utilizing the 5-3 exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase.Proc.Natl Acad.Sci.USA，1991，88：7276.

＼[12＼]Afonina IA，Reed MW，Lusby E，Shishkina IG，et al .Minor groove binder-conjugated DNA probes for quantitative DNA detection by hybridization-triggered fluorescence.Biotechniques，2002，32（4）：940.

＼[13＼]徐瑾，張順.梅毒螺旋體熒光定量PCR檢測方法的建立和初步臨床應(yīng)用.江西醫(yī)學檢驗，2005，23（6）：529-532.

＼[14＼]曾鐵兵，吳移謀，黃澎杰，等.巢式PCR擴增梅毒螺旋體polA及其臨床應(yīng)用的研究.中國皮膚性病學雜志，2004，18（2）：74-76.

篇(3)

關(guān)鍵詞：ADVIA Centaur XP；ARCHITECT i2000SR；比對試驗

0 引言

隨著國內(nèi)化學發(fā)光免疫分析技術(shù)的不斷成熟，化學發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)在臨床上應(yīng)用逐漸廣泛。現(xiàn)對我院引進的ADVIA Centaur XP和ARCHITECT i2000SR化學發(fā)光免疫分析儀在甲狀腺激素檢驗中進行比較分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年3月至2013年2月我院內(nèi)分泌門診和住院送檢的120例甲狀腺功能測定血清標本作為研究對象，其中低值40例，中值40例，高值40例。質(zhì)控物為Bio-RAD質(zhì)控血清，批號分別為40231、40232和40233[1]。使用儀器為ADVIA Centaur XP全自動化學發(fā)光免疫分析儀（西門子）和ARCHITECT i2000SR全自動化學發(fā)光免疫分析儀（雅培）及其配套試劑、標準品。

1.2 方法

對本組120例樣品先后使用ADVIA Centaur XP和ARCHITECT i2000SR檢測，記錄檢測數(shù)據(jù)。2臺儀器均每日檢測Bio-RAD質(zhì)控血清在控[2]。將ARCHITECT i2000SR作為參考儀器（作為坐標軸X），按照ADVIA Centaur XP定標液濃度配制血清作為標準品對ADVIA Centaur XP（作為坐標軸Y）進行校正，再次比較分析檢測結(jié)果[3]。

1.3 評價標準

參照澳大利亞室間質(zhì)量評價標準以t±1.5s或t±15%為日間CV可允許范圍；以系統(tǒng)誤差（SE%）

1.4 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均使用 SPSS17.0 數(shù)據(jù)分析軟件進行統(tǒng)計學處理，差異性比較采用t檢驗，進行可靠性分析、相關(guān)性分析和回歸分析，以P

2 結(jié)果

兩臺儀器不同Bio-RAD水平質(zhì)控物游離三碘甲腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）和促甲狀腺素（TSH）檢測結(jié)果顯示3批質(zhì)控物的日間CV及總CV均0.970。

由于ARCHITECT i2000SR質(zhì)評成績優(yōu)秀且進行定期校準因此在研究中作為目標系統(tǒng)，ADVIA Centaur XP自配校準后，兩臺儀器檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），F(xiàn)T3及FT4檢測結(jié)果均被臨床接受（見表3）。

3 討論

ADVIACentaur XP和ARCHITECT i2000SR均為臨床常用化學發(fā)光免疫分析儀，由于兩種儀器系統(tǒng)均采用順磁顆粒和磁性分離技術(shù)，自動化程度和準確性都較高，能夠測定包括內(nèi)分泌激素、血藥濃度、心血管疾病標志物、過敏原、腫瘤標志物以及免疫學各項指標等項目[5]。本組研究結(jié)果顯示兩臺儀器在不同Bio-RAD水平質(zhì)控物水平上日間CV及總CV均

參考文獻：

[1] 王治國. 臨床檢驗質(zhì)量控制技術(shù)[M]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2004： 38-54.

[2] 龔智仁， 曹春曉， 楊琦， 等. ADVIA Centaur XP與ARCHITECT i2000SR化學發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)的比對試驗[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志， 2012， 33（04）： 467-469.

[3] 譚云昌， 曾正蓮. 不同品牌化學發(fā)光儀檢測甲狀腺激素的相關(guān)性分析[J]. 檢驗醫(yī)學與臨床， 2010， 07（15）： 1622-1623.

篇(4)

【關(guān)鍵詞】 化學發(fā)光免疫分析技術(shù);基本原理;分類;應(yīng)用

近10多年來,當代生物技術(shù)的研究和應(yīng)用取得高速發(fā)展的同時,也大大推動了化學發(fā)光免疫分析方法(CLIA))的更新?lián)Q代速度。化學發(fā)光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技術(shù)(RIA)理論的基礎(chǔ)上,以標記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標記免疫分析法,具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡單、操作方便、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化和不污染環(huán)境等優(yōu)點,特別是能在較短的時間內(nèi)得到實驗結(jié)果,因此深受檢驗醫(yī)學工作者和臨床醫(yī)師的好評。

1 化學發(fā)光免疫分析的原理

化學發(fā)光免疫分析技術(shù)的基本原理,化學發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學發(fā)光分析兩個系統(tǒng)[1]。免疫分析系統(tǒng)是將化學發(fā)光物質(zhì)或酶作為標記物,直接標記在抗原或抗體上,經(jīng)過抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體免疫復合物。化學發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后,加入氧化劑或酶的發(fā)光底物,化學發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化劑的氧化后,形成一個處于激發(fā)態(tài)的中間體,會發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定的基態(tài),發(fā)光強度可以利用發(fā)光信號測量儀器進行檢測[2]。根據(jù)化學發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關(guān)系,可利用標準曲線計算出被測物的含量。

2 化學發(fā)光免疫分析的分類

化學發(fā)光免疫分析根據(jù)應(yīng)用發(fā)光體系應(yīng)用于免疫分析中的方式不同可分為直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析,酶催化化學發(fā)光免疫分析,電化學發(fā)光免疫分析(ECLIA)。直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析,目前常見的標記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學發(fā)光劑。

3 化學發(fā)光免疫分析的臨床應(yīng)用

CLIA已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學的各個領(lǐng)域,成為替代RIA的首選技術(shù)。Amersham公司針對AmerliteTM發(fā)光增強酶免疫分析系統(tǒng)研制出的試劑盒項目有甲狀腺功能檢測的促甲狀腺素、三碘甲腺原氨酸、甲狀腺素、甲狀腺素結(jié)合球蛋白、游離甲狀腺素,與性激素有關(guān)的有促黃體激素、促卵泡激素、人絨毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睪酮,以及其他方面的如癌胚抗原、鐵蛋白、地高辛等。Amersham公司雖然研制出這10余種試劑盒,但因操作不夠簡便,檢測項目僅限于蛋白質(zhì)類大分子化合物,未能廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學檢測。

美國Ciba Corning公司研制的ACS:180自動CLIA系統(tǒng)能非常精確測量閃光。經(jīng)過不斷的改進,實現(xiàn)了ACS:180CLIA系統(tǒng)的全自動化,推出全新產(chǎn)品"ADVIA系列"?，F(xiàn)有檢測項目47項,更多的項目還在開發(fā)之中。主要有甲狀腺系統(tǒng)、性腺系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、腫瘤標記物、心血管系統(tǒng)、血藥濃度及其他一些檢測項目。

經(jīng)過改良后,金剛烷衍生物在堿性磷酸酶作用下可發(fā)出高強度的輝光,光信號可持續(xù)1～2 h。隨后國外生產(chǎn)廠家研制出以堿性磷酸酶為標記物的試劑盒,與之相匹配的有DPC的IMMULITE全自動CLIA系統(tǒng)和Beckman的ACCESS全自動微粒子CLIA系統(tǒng)。IMMULITE全自動CLIA系統(tǒng)可檢測項目有心臟病、甲狀腺功能、性腺激素、傳染病、藥物、血清學、血液病、成癮藥物、糖尿病、過敏檢測和腫瘤標志物。ACCESS全自動微粒子CLIA系統(tǒng)主要可檢測甲狀腺功能、血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌激素、藥物、腫瘤因子、心血管系統(tǒng)和糖尿病等項目。

目前商品化的ECLIA分析系統(tǒng)只有Roche公司的ECLIA全自動分析系統(tǒng)。主要特點是本底信號極微,特異性更高,最小檢出值可達1 pmol以下,操作十分簡便快速,是CLIA優(yōu)點較為集中的完美分析技術(shù)。已提供試劑盒的項目有腫瘤標志物、甲狀腺功能、內(nèi)分泌、傳染病、心肌標志物和維生素類等項目。

王陽[3]運用了電化學免疫分析技術(shù),檢測了3種腫瘤標志物癌胚抗原(Carcinoem-bryonic Antigen,CEA)、細胞角蛋白l9片段(Cytokeratin 19fragments,CYFRA21,1)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)水平,對肺癌診斷有實際應(yīng)用價值。張忠英[4]等利用電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測尿CK19片段,結(jié)果顯示尿CK19檢測對膀胱癌等泌尿系統(tǒng)腫瘤診斷和復發(fā)監(jiān)測具有敏感性高、無創(chuàng)傷性的優(yōu)點,優(yōu)于血清CK19和尿細胞學檢查。動態(tài)觀察尿CK19片段含量的變化可降低急性尿感患者的假陽性率。王利娜[5]等應(yīng)用ECLIA測定和酶免疫測定(EIA)檢測乙肝標志物。結(jié)果:應(yīng)用ECLIA方法檢測HBsAg精密度,最大批內(nèi)變異≤8.30%,最大日間變異≤15.33%,HBsAg靈敏度0.05 ng/ml,HBeAg靈敏度0.03NCU/ml。HBsAg檢測范圍0.01～7 000 COI。顯示ECLIA檢測HBsAg靈敏度高,重復性好,檢測范圍寬。檢測HBeAg靈敏度可能更高。李錦洲[6]等采用ECLIA法對卵巢癌、良性卵巢腫瘤及健康婦女血清CA125分別進行測定,ECLIA用于第二代CA125(CA125-Ⅱ)測定,使CA125測定更加敏感恒定,每日之間差異較小。黃琛,湯漢紅等[7]在ECLIA法檢測與蛋白質(zhì)芯片法多腫瘤標志物結(jié)果差異的研究中顯示:兩種方法有較好的相關(guān)性(P

化學發(fā)光免疫分析技術(shù)在醫(yī)學的臨床應(yīng)用已非常成熟,有取代放射免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫分析技術(shù)而成為診斷市場上的主流產(chǎn)品的趨勢。國外的化學發(fā)光免疫分析檢測系統(tǒng)價格昂貴,普及有一定的困難;國內(nèi)的化學發(fā)光免疫分析檢測系統(tǒng)雖然價格較國外產(chǎn)品便宜很多,但其檢測的靈敏度和可靠性,還有待進一提高。研究者在如何提高免疫診斷的敏感性和特異性、發(fā)展新的分析體系和檢測技術(shù)便攜化等方面仍需要不斷努力。

參 考 文 獻

[1] 李美佳.當代免疫學技術(shù)與應(yīng)用.北京:北京醫(yī)科大學國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社,1998:549-561.

[2] 翟艷,王卉.化學發(fā)光免疫分析及其進展.長春中醫(yī)藥大學學報,2009,25(4):619-621.

[3] 王陽.電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測3種腫瘤標志物對肺癌的診斷意義.Chin J Lab Diagn,2006,10(3):294-296.

[4] 張忠英.電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測尿CK19片段的臨床應(yīng)用及其評價.中華檢驗醫(yī)學雜志,2005,28(1):50-53.

[5] 王利娜,姚智.電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測乙肝標志物的應(yīng)用.天津醫(yī)科大學學報,2008,14(1):48-50.

[6] 李錦洲,洪錫田,呂曉嫻.腫瘤標志物CA125檢測在卵巢癌診斷中的價值.中國誤診學雜志,2005,5(8):1456-1457.

[7] 黃琛,湯漢紅,王敏民.蛋白質(zhì)芯片技術(shù)與電化學發(fā)光技術(shù)檢測多腫瘤標志物結(jié)果的評價.天津醫(yī)藥,2008,36(12):942-944.

[8] 張瑞,賈良勇.電化學發(fā)光免疫分析法在HCG定量檢測中的應(yīng)用.延安大學學報(醫(yī)學科學版),2008,6(3):108-109.

[9] 田潤華,鄭春喜,王士珍.電化學發(fā)光免疫分析與臨床應(yīng)用.齊魯醫(yī)學雜志,2004,19(5):464-465.

[10] 周建光,楊梅.電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)與臨床應(yīng)用.醫(yī)療裝備,2010,23(5):23-24.

篇(5)

【關(guān)鍵詞】 臨床檢驗;應(yīng)用;化學發(fā)光免疫技術(shù)

化學發(fā)光免疫技術(shù)具有標本用量較少、穩(wěn)定性較高、標記物制備較容易、不污染環(huán)境、操作簡便以及便于實現(xiàn)自動化等優(yōu)點，主要將免疫分析與化學反光分析相結(jié)合，被廣泛應(yīng)用到臨床醫(yī)學和基礎(chǔ)醫(yī)學中?；瘜W發(fā)光免疫技術(shù)是繼酶免疫、發(fā)射免疫以及熒光免疫測定之后的免疫技術(shù)，在臨床檢驗中經(jīng)常需要檢測和分析表征性物質(zhì)，以判斷疾病以及身體病理特征[1]。通過在臨床檢驗中應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)，快速分析各種物質(zhì)，能夠提高檢測的靈敏度與準確度。

1 化學發(fā)光免疫技術(shù)的概況

化學發(fā)光免疫技術(shù)主要包括化學發(fā)光分析和免疫分析系統(tǒng)，用于抗原、抗體、酶、激素、維生素以及脂肪酸等檢測分析技術(shù)?；瘜W發(fā)光分析是根據(jù)免疫反應(yīng)情況，待免疫反應(yīng)完之后加入酶或氧化劑等發(fā)光底物，發(fā)光底物經(jīng)過氧化會形成處于激發(fā)狀態(tài)的中間體，通過發(fā)射光子來釋放能量，以達到穩(wěn)定狀態(tài)。而免疫分析是在抗體或抗原之上利用標記物進行直接的標記，標記物為化學物質(zhì)或酶，待抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)后，會產(chǎn)生帶有抗體免疫的復合物。

化學發(fā)光免疫技術(shù)的原理是以化學發(fā)光劑對抗體或抗原進行直接標記，待磁顆粒性、抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)之后，在磁場的作用下，分離處于游離狀態(tài)和結(jié)合狀態(tài)的化學發(fā)光劑，將發(fā)光促進劑加入到結(jié)合狀態(tài)的部分，使其進行快速的發(fā)光反應(yīng)，并以定性或定量的方式檢測處于結(jié)合狀態(tài)的發(fā)光強度?；瘜W發(fā)光免疫技術(shù)系統(tǒng)具有操作較為簡單，結(jié)果較為準確可靠，且自動化程度較高以及試劑儲存的時間較長等優(yōu)點，可根據(jù)激發(fā)態(tài)分子能量的來源，將化學發(fā)光的過程分為生物發(fā)光、光照發(fā)光和化學發(fā)光。

2 化學發(fā)光免疫技術(shù)在臨床檢驗中應(yīng)用的類別

化學發(fā)光免疫技術(shù)在臨床檢驗中，主要分為酶催化化學發(fā)光的免疫分析、直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析以及電化學發(fā)光的免疫分析。酶催化化學發(fā)光的免疫分析是通過抗體或抗原在標本中發(fā)生反應(yīng)之時，采用發(fā)光的酶作為標記物。直接標記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析是采用吖啶酯對體或抗原進行直接標記，待抗體或抗原發(fā)生免疫反應(yīng)后會產(chǎn)生一種復合物，加入氫氧化鈉和帶有雙氧水的氧化劑后呈堿性，出現(xiàn)發(fā)光、分解等現(xiàn)象[2]。而電化學發(fā)光的免疫分析過程包括化學反光和電化學，將三丙胺作為電子供體，對抗體或抗原用三聯(lián)吡啶釕進行標記，在電場的作用下，通過電子轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生發(fā)光反應(yīng)。

3 在臨床檢驗中應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)的分析

3.1 應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)分析傳染性疾病 乙型肝炎病毒是血清學的標志物，是治療和評價機體免疫功能的重要指標。診斷乙型肝炎病毒中的抗體或抗原的表面部分是否受到感染，這樣的診斷為常規(guī)酶法，但常規(guī)酶法會使低病毒含量的攜帶者出現(xiàn)漏檢的情況。化學發(fā)光免疫技術(shù)和以前的常規(guī)酶法相比，具有線性范圍寬和高靈敏度等特點，在臨床檢驗中應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)對傳染性疾病進行分析，如對于已感染免疫病毒的兒童，應(yīng)對其體內(nèi)的甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒以及單純皰疹病毒以Bowser等進行測定，檢測出的靈敏度較高。

3.2 應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)分析腫瘤標志物 腫瘤標志物指腫瘤腫瘤在發(fā)生與增殖的過程中，通過腫瘤細胞進行合成、釋放或者是機體與腫瘤細胞發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生酶、激素、白質(zhì)以及癌基因產(chǎn)物等物質(zhì)?；颊叩募毎?、血液以及組織中都會有腫瘤標志物，利用化學發(fā)光免疫技術(shù)能夠快速的尋找到難以發(fā)現(xiàn)的腫瘤標志物。通過對患者進行體外的輔助診斷以及術(shù)后監(jiān)測，能夠緩解患者的病痛。采用Mac等診斷和監(jiān)測食管癌患者的病情，如對血清中的癌胚抗原濃度、鱗狀細胞癌的抗原濃度等進行檢測。以Raslan和Shabin對健康孕婦德陰道液和胎膜早破中的人絨毛膜促線性激素和AFP標志物進行比較，AFP的特異性和敏感度較高。

3.3 應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)分析心臟疾病 在臨床檢驗中，經(jīng)常以同丁酶對心臟疾病患者進行定量測定。心肌損傷的標志物包括肌酸激酶、肌紅蛋白和肌鈣蛋白T，應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)分析心臟疾病的標記物，能夠提高檢測的準確度。通過采用Dutra等將肌鈣蛋白T(cTnT)的受體分子制成免疫傳感器，應(yīng)用于早期心肌梗死的臨床檢測，其方法較好，具有相關(guān)性，可以應(yīng)用到臨床中對標本進行檢測。

3.4 應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)分析激素 激素是細胞和細胞間進行信息傳遞的媒介，主要指散在內(nèi)分泌細胞中或內(nèi)分泌腺所分泌出來的高效能的活性物質(zhì)。在臨床檢測中應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)分析和測定性激素、甲狀腺激素等激素，能夠為臨床診斷和治療提供比較可靠、準確的實驗室數(shù)據(jù)，提高檢測的靈敏度和特異性[3]。通過以Vutyavanich等對血清中的促黃體生成素、素、促卵泡生成素以及催乳素等進行檢測，以Karlsson對患者甲狀旁腺進行檢測，以Gayk和Schmidt對骨代謝標志物中的降鈣素進行測量，并和放射免疫法相比，其精密度和準確度較高。

3.5 應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)分析其他物質(zhì) 在臨床檢驗中，應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)還可以分析細菌、維生素、免疫球蛋白、細胞因子、酶以及基因等。通過Dasgupta等對血清中高辛含量進行檢測，以Quan等對食物中含有的鹽曲霉毒素B1進行檢測。

綜上所述，化學發(fā)光免疫技術(shù)具有不污染環(huán)境、操作簡便以及便于實現(xiàn)自動化等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用到臨床醫(yī)學和基礎(chǔ)醫(yī)學中。在臨床檢驗中應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)，能夠為臨床檢驗提供數(shù)據(jù)依據(jù)，提高檢測的精密度和準確度。

參考文獻

[1] 施麗娟.發(fā)光免疫分析技術(shù)及在臨床檢驗中的應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2012，6(4)：57-58.

篇(6)

【關(guān)鍵詞】實驗室；自動化檢測；管理；培訓

【中圖分類號】R185 【文獻標識碼】B 【文章編號】1005-0515(2011)07-0313-01

目前，九江市中心血站必須檢測項目為：血紅蛋白、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV（1+2）、抗TP、ABO血型正反定、RH(D)血型，另外我站還開展了ABO、RH血型效價的檢測，吸收放散實驗等項目。并對臨床用血進行臨床咨詢與督導。

1 依據(jù)

嚴格按照《獻血法》、《血站管理辦法》、《血站質(zhì)量管理規(guī)范》和《血站實驗室管理規(guī)范》要求，制定嚴格的管理制度和實驗室檢測程序。不斷改進，提高血站的自動化檢測管理水平，使病患者使用合格、放心的血液，創(chuàng)立血站的品牌效應(yīng)。自2008年，我站通過了ISO9001:2000國際認證，并每年由認證公司來進行認證，2010年正式升級為為ISO9001：2008版認證，同時培養(yǎng)了一批內(nèi)審員，并進行考核獲得了上崗證。實行內(nèi)審員輪流對從血液采集到血液的發(fā)送整個操作流程進行審核，每年還進行質(zhì)量審核。在現(xiàn)有工作程序的基礎(chǔ)上，不斷提出問題、發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，不斷推進改革與創(chuàng)新。

2 人員素質(zhì)

對每位新進入員工，由資深工作人員帶教，經(jīng)過培訓合格，并取得國家規(guī)定的血站工作人員上崗證，而HIV的檢測必須要求持有全省HIV培訓結(jié)業(yè)證才能獨立操作HIV的檢測并有簽名權(quán)。對報告的最終判定及發(fā)送，必須由經(jīng)過培訓及授權(quán)的人員審核整個實驗過程反復核對后才能最終將結(jié)果發(fā)送至供血科，供臨床使用。

還要求每位員工必須每年有75課時的培訓，年初制定出每月的培訓計劃，不斷的完善工作中的不足，對已發(fā)生的錯誤要求開科室質(zhì)量會議全科人員共同探討原因，并分析原因及時提出預防措施，提高工作效率。對檢測過程中存在的不足，共同討論尋求最佳處理方法。

3 設(shè)備與儀器管理

建立和實施儀器設(shè)備的確認，維護、校準、備案等制度，必須具有唯一的標識專人專管。每日做好儀器的維護、保養(yǎng)，每月專人進行全面維護、保養(yǎng)，另對關(guān)鍵設(shè)備要先進行確認有備用設(shè)備及緊急預案措施，并要求有UPS電源。關(guān)鍵設(shè)備有公司、工程師定期校準。硬件方面：1998年，已由國家配發(fā)了一臺RSP加樣儀，2003年，我站首次購買了FAME16/20；全自動酶免檢測系統(tǒng)，完成了從進板到加樣、洗板、孵育，讀板等程序的自動化檢測過程。2009年，我站投入大量資金嚴格按《病原微生物實驗室生物安全管理條例》要求升級改造實驗室。自2006年以來，我站已完成了血型自動化檢測的模式，避免了人為誤差，血型檔案從無原始檔案發(fā)展為有資料可循，與免疫結(jié)果一樣具有可追溯性。到2009年，我站由于采血量的加大，不能滿足我站的檢測要求，又增加了一臺FAME24/30與加樣儀STAR，這樣使我站的檢測真正做到同一標本，不同的試劑，不同的工作人員，不同的儀器設(shè)備進行檢測，降低了漏檢發(fā)生的可能性。在2009年我站在全省第二個運用了實驗室結(jié)果及質(zhì)量檢測軟件Liswell，這樣從標本的交接、檢測、結(jié)果、標本保存、銷毀、都有一套完整的記錄程序，并對每個過程都以書面形式保存和備份，真正實現(xiàn)實驗室的自動化、標準化、現(xiàn)代化管理。且對每日的結(jié)果數(shù)據(jù)備份成光碟，定期交檔案是存檔。并于2010年新引進了日立全自動生化分析儀，運用速率法更準確的檢測ALT。

4 試劑與標本處理

所用試劑必須經(jīng)國家認可，經(jīng)質(zhì)檢部門及本站質(zhì)控科確認合格的試劑，使用前將試劑放于室溫平衡半小時，使用前檢查試劑的完整性，并按比例配制試劑等，并將實驗室溫度嚴格控制在18-25。C，45%-80%。

九江市現(xiàn)用試劑部分為進口試劑，這樣有效縮短了窗口期，對提高病人的用血安全和工作人員自我保護起到了一定作用。并嚴格執(zhí)行試劑的保存、出入庫、交接手續(xù)等制度。在標本處理完畢后，按順序?qū)吮痉胖萌詣蛹訕觾x，按先加酶免，再加血型的原則，因免疫加樣儀為STAR一次性加樣尖，而血型加樣為RSP加樣儀，而血型加樣儀為反復加樣針，以此避免標本的污染。

血液的標本在本站目前還是一個標本做多個項目，在本實驗室要求5ML+1ML的標本量，并要求在外采血后針頭不拔出試管，并在檢驗科標本交接時仔細核對試管上的條碼與血辮上的條碼是否一致，避免張冠李戴現(xiàn)象。觀察血標本的外觀，有無溶血，脂血的異?，F(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)任何問題，填寫標本返工單，要求外采人員重新取樣，確保標本符合各檢驗項目的要求。

5 操作流程要求

對檢驗科免疫項目的檢測原始記錄，整個實驗操作步驟精確到每分每秒，保證有據(jù)可依，所有相關(guān)記錄做到”做我所寫，寫我所做。確保檢測項目、實驗步驟、檢測結(jié)果的準確性和可靠性，具有可返溯性。同時，還實行了嚴格的檔案管理制度，定期進行總結(jié)、整理、匯總、歸檔。

參考文獻

[1] 衛(wèi)生部：血站質(zhì)量管理規(guī)范[S].2006年，167

[2] 衛(wèi)生部：血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范[S].2006年，183

[3] 段瑞.血站實驗室自動化檢測與管理[J].實用醫(yī)技雜志，2008(30)

篇(7)

1 SELEX技術(shù)簡介

1. 1篩選過程

SELEX技術(shù)依據(jù)分子生物學的原理，首先人工構(gòu)建一個隨機寡核苷酸文庫，隨機核苷酸序列的長度為20-40bp左右，所包含的不同種立體構(gòu)象，幾乎可以涵蓋自然界存在的所有種類的靶分子。將靶標物質(zhì)與隨機文庫在一定條件下進行混合，形成文庫洋巴標復合物，把未結(jié)合的核酸洗脫掉，富集與靶物質(zhì)結(jié)合的核酸分子，以后者為模板進行PC R擴增，得到的產(chǎn)物經(jīng)分離純化后，作為進行下一輪篩選的模板。如此反復，通過多輪(8-15輪)篩選，與靶標不結(jié)合或親和性弱的核酸分子被充分去除，而與靶分子親和性強的核酸分子被分離出來，同時其純度隨著篩選輪數(shù)的增加而增加。最后篩選到的文庫要經(jīng)過克隆測序和特異性修飾，經(jīng)過這些步驟后，所獲得的特異識別靶分子的核酸才是適配體。

1.2優(yōu)勢和特點

1)親和力高、特異性強。適配體與靶標之間，憑借彼此互補的三維結(jié)構(gòu)，相互作用后形成牢固穩(wěn)定的復合物，其解離常數(shù)通常能達到pmol/L-nmol/L的水平，并且能分辨出靶標結(jié)構(gòu)上細微的差別。

2)庫容量大，識別范圍廣泛。SELEX技術(shù)的靶標遠遠多于經(jīng)典的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，除了有蛋白質(zhì)、核苷酸分子外，還可以是糖類、氨基酸、維生素、抗生素、金屬離子、有機染料，甚至可以是細菌、病毒、寄生蟲等完整的細胞或組織，幾乎囊括了自然界中的全部物質(zhì)。

3)合成容易，獲得方便，易于修飾。適配體的體積比傳統(tǒng)抗體小，篩選過程簡便、周期短，對實驗室的要求不高，并具備自動化控制的巨大潛力。經(jīng)過化學合成和修飾以后可保持原生物活性不變，還可以增強其穩(wěn)定性并增加其他新的化學性質(zhì)，參加多類反應(yīng)。標記了熒光、生物素和納米金顆粒之后，發(fā)展出了諸如分子成像技術(shù)等疾病診斷新方法。

4)重復性好，純度高。整個篩選和制備的過程在人為控制之下，所得到的適配體幾乎沒有生產(chǎn)批次之間的差異，便于日后的大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用。

5)分子量小、穩(wěn)定性高。相對于抗體或酶，適配體的化學性質(zhì)更穩(wěn)定，不易降解，對溫度不敏感，保存時間長，即使變形也能在很短的時間內(nèi)復性，利于室溫下運輸。

6)應(yīng)用便捷。SELEX技術(shù)所獲得的適配體又被稱作是核酸型抗體，其優(yōu)于傳統(tǒng)抗體的性質(zhì)是沒有免疫原性，因此便能獲得一些低免疫原性甚至無免疫原性靶分子的適配體。并且還省去了傳統(tǒng)抗體制備過程中的動物實驗，而直接從體外文庫中獲取。而且適配體更容易通過細胞膜，并且沒有毒性，利于檢測細胞內(nèi)的靶分子和實現(xiàn)多層次的調(diào)控，并能較快地被機體清除代謝掉，經(jīng)過特定的化學修飾后，還可使半衰期延長，穩(wěn)定性提高，便于科學研究和疾病診治。

2 SELEX技術(shù)的發(fā)展

目前SELEX技術(shù)出現(xiàn)了一些新的篩選方法，越來越多的與各種標靶相對應(yīng)的適配體被篩選出來。如毛細管電泳法、硝酸纖維素膜過濾法、磁珠分離法、親和色譜法、Non SELEX技術(shù)、無引物PCR SELEX技術(shù)、微流體SELEX技術(shù)、生物芯片SELEX技術(shù)、原子力顯微鏡等各種新的模式也被應(yīng)用到適配體的篩選中。同時還出現(xiàn)了SELEX技術(shù)與定量PCRSEL-EX技術(shù)與流式細胞儀、SELEX技術(shù)與ELISA的聯(lián)合應(yīng)用，更是極大的提升了篩選的效率和準確性。

2. 1消減SELEX技術(shù)

消減SELEX技術(shù)是一種經(jīng)過改良的SELEX技術(shù)。以完整細胞為靶標的消減SELEX技術(shù)，是在篩選過程中以完整的細胞作為靶標，并消減掉能與已知或未知的共有靶標結(jié)合的配體，經(jīng)過消減后的次級隨機文庫再投入到特異靶標的篩選中。它的意義在于可以實現(xiàn)從兩組高度同源的完整細胞中，篩選出針對其中一種細胞的特異性適配體。這項技術(shù)可應(yīng)用于發(fā)現(xiàn)新的腫瘤細胞識別結(jié)構(gòu)，還可進一步作為生物導彈，獨立完成靶向治療或攜帶藥物，未來將會在腫瘤的治療中發(fā)揮巨大的功效。

2. 2自動化SELEX技術(shù)

傳統(tǒng)的SELEX技術(shù)過程需要完成一套重復繁瑣的操作，使得篩選相對耗時耗力。自動化SELEX技術(shù)的建立可以簡化篩選過程，節(jié)約時間和物品的消耗，實現(xiàn)高通量和限定范圍，達到同時篩選多個靶分子的效果。自動化SELEX技術(shù)離不開現(xiàn)代分離儀器的配合，后者的發(fā)展推動了前者的進步。2001年等使用Biome 2000自動化工作站成功篩選到了溶菌酶的特異性適配體，通過這種自動化篩選平臺，不到2d就完成了12輪的篩選。

2. 3導向SELEX技術(shù)

適配體的特異性是整個SELEX技術(shù)的核心所在，為了提高適配體的特異性和穩(wěn)定性，可將已知的能與靶標非特異結(jié)合的分子摻入到文庫中或預先與靶標進行混合后再篩選，這樣可獲得只與靶標特異結(jié)合的適配體。2002年Hamm等將此技術(shù)與抗個體基因型的方法聯(lián)合運用，成功獲得了特定激酶抑制劑的特異性RNA適配體。Martell運用特殊的導向SELEX技術(shù)，從隨機表達盒雜交文庫中篩選到了能與E2F蛋白具有高親和性的RNA適配體。

3 SELEX技術(shù)在醫(yī)學中的應(yīng)用

3. 1 SELEX技術(shù)在基礎(chǔ)醫(yī)學研究中的應(yīng)用

依據(jù)核酸適配體具有與靶物質(zhì)高特異性結(jié)合的能力，可以幫助我們尋找到疾病的發(fā)病機制。Roulette等提出把SELEX技術(shù)同基因表達串行分析手段聯(lián)合應(yīng)用，并通過自動化的序列提取工藝，建立轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的定位模型。通過對轉(zhuǎn)錄因子適配體文庫中的某一序列進行測序，可了解該蛋白結(jié)合位點的特異性，探尋一些以前在基因組中從未研究過的結(jié)合位點，掌握在不同的核苷酸位點上非獨立堿基出現(xiàn)的先后順序，為闡明其結(jié)合機制提供一些線索等采取SELEX技術(shù)發(fā)現(xiàn)，TRF1二聚體在端粒上有兩個相同的識別半位點，它們的距離可以變化，且兩個半位點的順序方向沒有區(qū)別。這為探索端粒長度的調(diào)節(jié)機制提供了新依據(jù)。

3. 2 SELEX技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用

腫瘤細胞及其標志物的早期檢測對于腫瘤的診斷及預后極為重要，目前已經(jīng)篩選出多種腫瘤的特異性適配體，例如急性髓系白血病的適配體,急性淋巴細胞白血病的適配體、、惡性膠質(zhì)瘤的適配體淋巴瘤的適配體TDOS、非小細胞肺癌的適配體、小細胞肺癌的適配體、乳腺癌的適配體、結(jié)腸癌的適配體、小鼠肝癌的適配體、卵巢癌的適配體。它們可以特異地識別腫瘤細胞，僅需少量腫瘤細胞即可實現(xiàn)準確的鑒別和分型。將適配體與納米顆粒結(jié)合后通過比色檢測，觀察顏色的變化即可判斷有無靶標細胞。這個實驗非常敏感，樣本中的靶細胞數(shù)超過百個即可檢測出來，還不需要昂貴的檢測設(shè)備和待檢靶標的標記與修飾。因此，有可能成為常規(guī)篩查活體標本中新生腫瘤細胞的一種新方案。與此同時腫瘤細胞的分子成像技術(shù)也已經(jīng)問世，它能夠從細胞水平對生物過程進行可視化描述及測量，不僅能定位病灶，觀察某些影響腫瘤細胞行為的生物過程，還能觀察腫瘤細胞對藥物的反應(yīng)。Kim等研究將前列腺特異性膜抗原(PSMA)的特異性適配體與金納米材料結(jié)合后，帶有PSMA的前列腺癌細胞便能夠被特異性地標記出來，將其作為造影劑應(yīng)用在前列腺腫瘤的影像學診斷中，比傳統(tǒng)的造影劑顯像時間更持久，毒副作用更小，應(yīng)用價值更顯著。

SELEX技術(shù)還在血液的生化檢查方面，顯示出一定的應(yīng)用前景。用其檢測血液中的某些靶分子，將比傳統(tǒng)方法更特異和高效。腦尿鈉膚(BNP)常被臨床上用來評價急性心力衰竭或急性呼吸窘迫癥患者的病情和預后。Lin等采用SELEX技術(shù)的原理，篩選到了能與BNP特異結(jié)合的適配體。在微流體試驗模式下，被熒光標記的適配體可以快速測出血液中BNP的濃度，比放射免疫分析法或是免疫分析技術(shù)更精確、更經(jīng)濟。反應(yīng)蛋白(CRP)是機體在應(yīng)激狀態(tài)下生成的一種非特異性的急性時相反應(yīng)蛋白，CRP與冠狀動脈粥樣硬化、心肌梗死等心血管疾病具相關(guān)性。Bin等開發(fā)出了一種帶有光化學性質(zhì)的CRP特異性適配體，當血液中的CRP濃度超0.005mg/L時就能被檢測出來，敏感度非常高。這一成果為新型CRP診斷試劑的研制奠定了基礎(chǔ)。

SELEX技術(shù)還被應(yīng)用在病原微生物的檢測，其能克服傳統(tǒng)檢測方法在特異性和敏感性上的缺陷，為新型檢測試劑盒的開發(fā)提供有力支持。例如結(jié)合分支桿菌的特異性適配體CSRI 2. 11檢測過程比傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定法更省時更敏感;丙型肝炎病毒的適配體ZE2可結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗實現(xiàn)丙型肝炎的早期篩查，不受抗體檢測時窗口期的制約;瘧原蟲乳酸脫氫酶的適配體PL1在臨床實踐中，可以很好的區(qū)分患者是否感染了出間日瘧原蟲或惡性瘧原蟲。

3. 3 SELEX技術(shù)在疾病治療中的應(yīng)用

SELEX技術(shù)在疾病治療中的功效越來越來受到人們的重視。適配體在體內(nèi)與靶分子結(jié)合，理論上可以對靶分子的生理功能和代謝過程產(chǎn)生影響，靶分子也會因此發(fā)生信號傳導的改變甚至喪失原本的功能，直接或間接阻斷疾病發(fā)生進程。以此開發(fā)的靶蛋白功能阻斷劑，日益顯示出其巨大的潛力。全球首個適配體藥物是2004年由美國食品和藥物管理局批準上市的呱加他尼鈉，可用來治療老年性黃斑變性。

SELEX技術(shù)在凝血系統(tǒng)疾病的治療上具有一定的意義，已找到了可用作抗凝血和抗血栓藥物的適配體，其結(jié)合的位點是凝血酶的肝素結(jié)合位點以及纖維蛋白原結(jié)合位點。在治療免疫系統(tǒng)疾病方面，也已獲得了具有藥物開發(fā)潛力的特異性適配體，如可用來拮抗自身抗體已達到治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的適配體，還有能刺激T細胞釋放的適配體。對于腫瘤的治療，基于SELEX技術(shù)研制的適配體藥物更是走在前列，進入到了臨床試驗階段。如對實體瘤和復發(fā)性急性髓樣白血病有良好療效的AS1411，更出現(xiàn)了連接金納米棒的適配體，用作腫瘤靶向光熱治療回。適配體藥物作為抗病毒藥，也展現(xiàn)出良好的前景，比如用來抑制狂犬病病毒的復制和干擾艾滋病病毒的體內(nèi)合成。除此以外，核酸適配體還可作為運輸工具，特異性地把藥物運送至靶標細胞或組織達到定點清除的治療效果，研究比較成熟的有裝載著阿霉素，用來殺傷前列腺癌細胞的復合適配體藥物。