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頭蛋白shRNA和骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的協(xié)同作用對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨能力的影響
- 間質(zhì)干細(xì)胞
- 骨髓
- 骨形態(tài)發(fā)生蛋白質(zhì)2
- 轉(zhuǎn)染
- 頭蛋白
摘要：目的:觀察頭蛋白shRNA和骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bonemorphogeneticprotein2,BMP-2)的協(xié)同作用對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)成骨能力的影響。方法:分離、培養(yǎng)兔BMSCs,分為頭蛋白shRNA基因干擾組、BMP-2過(guò)表達(dá)組、雙基因轉(zhuǎn)染組。構(gòu)建慢病毒頭蛋白shRNA干擾載體和BMP-2過(guò)表達(dá)載體。頭蛋白shRNA基因干擾組、BMP-2過(guò)表達(dá)組分別加入頭蛋白shRNA基因干擾載體和BMP-2過(guò)表達(dá)載體,雙基因轉(zhuǎn)染組同時(shí)加入頭蛋白shRNA基因干擾載體和BMP-2過(guò)表達(dá)載體,進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染?；蜣D(zhuǎn)染成功后,采用熒光定量PCR檢測(cè)3組BMSCs中頭蛋白和BMP-2的mRNA相對(duì)表達(dá)量,采用茜素紅染色和堿性磷酸酶染色檢測(cè)3組BMSCs的誘導(dǎo)成骨能力。結(jié)果:①細(xì)胞培養(yǎng)和基因轉(zhuǎn)染鑒定結(jié)果。流式細(xì)胞儀檢測(cè)第2代培養(yǎng)細(xì)胞,CD44和CD29表達(dá)分別為61.3%和57.2%,CD34和CD45表達(dá)分別為3.6%和2.4%,符合BMSCs表型特征?；蜣D(zhuǎn)染72h后,3組BMSCs的轉(zhuǎn)染率為(92.5±2.5)%,基因轉(zhuǎn)染成功。②頭蛋白和BMP-2mRNA表達(dá)檢測(cè)結(jié)果?；蜣D(zhuǎn)染成功后,3組細(xì)胞中頭蛋白mRNA相對(duì)表達(dá)量的組間總體比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.343±0.124,1.040±0.269,0.123±0.057;F=22.390,P=0.002);BMP-2過(guò)表達(dá)組較頭蛋白shRNA基因干擾組和雙基因轉(zhuǎn)染組高(P=0.016,P=0.005),頭蛋白shRNA基因干擾組和雙基因轉(zhuǎn)染組的組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.054)。3組細(xì)胞中BMP-2mRNA相對(duì)表達(dá)量的組間總體比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.120±0.363,3.667±0.431,4.833±0.475;F=59.680,P=0.000)。雙基因轉(zhuǎn)染組較頭蛋白shRNA基因干擾組和BMP-2過(guò)表達(dá)組高(P=0.000,P=0.035),BMP-2過(guò)表達(dá)組高于頭蛋白shRNA基因干擾組(P=0.001)。③茜素紅和堿性磷酸酶染色結(jié)果。茜素紅染色可見(jiàn)胞漿邊緣呈現(xiàn)不透光的礦化結(jié)節(jié)。3組細(xì)胞茜素紅染色陽(yáng)性率的組間總體比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(62.317±3.969)%,(39.267±2.170)%,(72.320±4.133)%,F=68.870,P=0.000];雙基因轉(zhuǎn)染組高于頭蛋白shRNA?
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中醫(yī)正骨
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