摘要：目的探討1例臨床出血表現(xiàn)與凝血因子Ⅷ活性（Fvm：C）檢測結(jié)果明顯不符的血友病A患者表型、基因型診斷及其分子發(fā)病機制。方法凝血、抗凝及纖溶相關(guān)指標檢測，一步法及發(fā)色底物法檢測FⅧ：C，ELISA法檢測FⅧ的抗原（FVIH：Ag）?；罨糠帜蠲笗r間（APTr）糾正實驗篩查FⅧ抑制物；PCR擴增先證者F8基因的所有外顯子及其側(cè)翼序列，利用直接核苷酸測序法進行基因序列分析。針對先證者的基因突變位點，對其家系成員進行相應(yīng)外顯子基因檢測；定點突變法構(gòu)建B亞基缺失（760aa～1639aa）的人FⅧHis99Arg和His99Ala兩種突變的表達質(zhì)粒（pRC／RSV—BDhFⅧcDNA），兩種突變質(zhì)粒分別瞬時轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，測定細胞上清液中的FⅧ：C和細胞上清液及裂解液中的FVIU：Ag。結(jié)果先證者APTT延長，一步法及發(fā)色底物法檢測的FⅧ：C均低于1．0％，血漿FⅧ：Ag為120．0％。APTT糾正試驗陰性，其他凝血、抗凝及纖溶相關(guān)檢測均未見異常。診斷為交叉反應(yīng)陽性（CRM＋）的血友病A?；颊逨、8基因直接核苷酸測序發(fā)現(xiàn)3號外顯子存在28828A→G突變，導(dǎo)致His99Arg氨基酸改變，其母親該位點為雜合突變。體外表達研究結(jié)果顯示細胞上清液中His99Arg突變蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分別為野生型的180．0％及5，8％，His99Ala突變蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分別為野生型的45．0％和20．0％。Western blot顯示，His99Arg突變質(zhì)粒表達上清液中FⅧ蛋白含量較野生型明顯增高，而His99Ala突變質(zhì)粒表達上清液FⅧ蛋白含量較野生型減少。提示His99Arg為CRM＋血友病A突變而His99Ala為CRM-血友病A突變。結(jié)論體外檢測發(fā)現(xiàn)His99Arg和His99Ala兩種FVI能夠表達，但常規(guī)凝血檢測His99Arg突變FⅧ基本無功能，而His99Ala凝血功能也降低。