摘要：目的建立簡(jiǎn)便的小鼠原代視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞(RMPs)分離、純化、培養(yǎng)方法.方法在體視顯微鏡下機(jī)械分離獲取小鼠視網(wǎng)膜,并碎化、膠原酶消化、過濾處理,收集視網(wǎng)膜碎片,預(yù)孵24h后用接種于含有體積分?jǐn)?shù)20%胎牛血清的低糖型DMEM6孔板進(jìn)行培養(yǎng),并采用差異消化法純化原代RMPs.通過倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),免疫熒光法鑒定周細(xì)胞標(biāo)志物,周細(xì)胞/內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)鑒定周細(xì)胞的功能.結(jié)果經(jīng)預(yù)孵的視網(wǎng)膜碎片再次孵育24h后,細(xì)胞開始從視網(wǎng)膜碎片中遷移出,逐漸增生形成大小不一的細(xì)胞集落.原代或子代細(xì)胞胞體呈不規(guī)則三角形,多個(gè)長(zhǎng)突觸,無接觸性抑制.免疫熒光顯示第3代細(xì)胞絕大部分α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、血小板源性生長(zhǎng)因子受體β(PDGFR-β)表達(dá)陽(yáng)性,極少部分膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)陽(yáng)性,vonWillebrand因子(vWF)表達(dá)陰性,RMPs純度達(dá)97%以上.體外培養(yǎng)的小鼠RMPs能被血管內(nèi)皮細(xì)胞所募集,共同形成微血管樣條索.結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功建立了一種簡(jiǎn)便的小鼠原代RMPs分離、純化、培養(yǎng)方法,所培養(yǎng)的小鼠原代RMPs為功能性RMPs.