摘要：為了建立檢測(cè)豬偽狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫時(shí)特異的IgA抗體的間接ELISA方法,本研究采用PCR方法擴(kuò)增了PRV gB基因截短片段,并將其連入原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-6P-1,構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),得到gB重組蛋白的可溶性表達(dá),并用谷胱甘肽親和層析柱進(jìn)行蛋白純化。以純化的gB重組蛋白作為包被抗原,以山羊抗豬IgA-HRP為二抗,建立了豬偽狂犬病病毒IgA的間接ELISA檢測(cè)方法。經(jīng)ELISA反應(yīng)條件優(yōu)化,確定抗原包被濃度為2.4 g/mL,封閉液為10 g/L明膠,一抗37℃孵育1.5 h,二抗1∶20000稀釋后37℃孵育0.5 h,TMB顯色液顯色10 min。該方法的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10%,重復(fù)性較好。利用該間接ELISA方法對(duì)PRV黏膜免疫的仔豬進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果可以在鼻腔黏液中檢測(cè)出特異的IgA抗體。本試驗(yàn)為PRV黏膜免疫提供了初步檢測(cè)方法。