摘要：目的通過(guò)CRISPR/Cas9技術(shù)獲得肌肉特異性表達(dá)Cas9蛋白小鼠胚胎,為建立肌肉特異表達(dá)Cas9小鼠動(dòng)物模型奠定基礎(chǔ)。方法設(shè)計(jì)小鼠Rosa26位點(diǎn)sgRNA并通過(guò)體外酶切驗(yàn)證活性,同時(shí)使用同源重組構(gòu)建肌肉特異性同源打靶載體;通過(guò)顯微注射將Rosa26sgRNA與Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通過(guò)PCR及測(cè)序檢測(cè)胚胎的編輯情況,同時(shí)移植到假孕母鼠體內(nèi),待其生產(chǎn);將同源打靶載體與Rosa26sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通過(guò)PCR檢測(cè)整合情況。結(jié)果體外酶切實(shí)驗(yàn)表明,體外轉(zhuǎn)錄的sgRNA與Cas9蛋白聯(lián)合可對(duì)靶位點(diǎn)產(chǎn)生編輯作用;成功構(gòu)建了肌肉特異性同源打靶載體Donor-SP-px459;通過(guò)原核注射獲得Rosa26基因編輯胚胎,經(jīng)移植獲得Rosa26基因編輯小鼠;注射同源打靶載體后,成功獲得肌肉特異表達(dá)Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。結(jié)論利用CRISPR/Cas9技術(shù),成功獲得Rosa26基因編輯胚胎和小鼠,并獲得了肌肉特異性表達(dá)Cas9蛋白小鼠胚胎,為利用基因打靶構(gòu)建肌肉特異表達(dá)Cas9的小鼠動(dòng)物模型奠定基礎(chǔ)。