摘要：目的制備促黃體激素釋放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探討其抗腫瘤作用。方法以重組質粒pET28a-p53為模板,經(jīng)PCR擴增目的基因,雙酶切,克隆至原核表達載體p ET20b中,構建重組表達質粒p ET20b-LHRH-TAT-p53,并在E. coli中IPTG誘導表達,經(jīng)金屬螯合層析、DEAE弱陰離子交換層析純化目的蛋白。取對數(shù)生長期的HeLa、BGC及MDCK細胞進行細胞活性試驗,檢測pET28a-p53蛋白活性。結果經(jīng)雙酶切及測序鑒定,重組質粒pET20b-LHRH-TAT-p53構建正確;融合蛋白相對分子質量約54 000,主要以包涵體形式存在,表達量約占菌體總蛋白55%;HeLa及BGC細胞加入純化復性的重組蛋白后,細胞變圓、色暗、折光性變差,甚至裂解死亡,細胞死亡數(shù)增加,而MDCK細胞無變化;一定濃度范圍內(nèi)(25~120μg/m L)蛋白對HeLa及BGC細胞有明顯的抑制作用。結論成功制備了LHRH-TAT-p53融合蛋白,該蛋白具有生物活性,對腫瘤細胞有殺傷作用。本研究為下一步制備靶向LHRH的腫瘤治療藥物提供了參考。