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CRISPR/Cas9建立IL-12p35基因敲除大鼠C6細胞系表達研究
- c6
- 慢病毒源性載體
摘要：目的:運用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除大鼠C6細胞系的IL-12p35基因,構(gòu)建IL-12p35基因穩(wěn)定敲除細胞株。方法:構(gòu)建Lenti-sgRNA-EGFP質(zhì)粒CRISPR/Cas9系統(tǒng)的Cas9核酸內(nèi)切酶基因,慢病毒感染C6細胞后進行MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]檢測及PI-FACS(Facial Action Coding System)細胞周期檢測。結(jié)果:針對IL-12p35基因的KO1、KO2、KO3三個靶點,進行慢病毒轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率均大于80%。酶切前后靶點活性均下調(diào),免疫印跡驗證C6細胞中靶點有效性。MTT檢測結(jié)果IL-12p35基因敲除后于第5天細胞增殖倍數(shù)明顯降低。IL-12p35基因敲除后顯著影響細胞周期G1期,G2/M期。結(jié)論:本研究構(gòu)建IL-12p35基因的CRISPR/Cas9敲除系統(tǒng),獲得穩(wěn)定的IL-12p35基因敲除細胞株,為后期IL-12p35與膠質(zhì)瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展機制方面研究提供基礎(chǔ)。
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中國免疫學
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