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蛋白激酶9在約氏瘧原蟲生長發(fā)育中的作用
- 約氏瘧原蟲
- 蛋白激酶9
- 紅內(nèi)期
摘要：目的探究蛋白激酶9 (PK9)在約氏瘧原蟲生長發(fā)育中的作用。方法基于瘧原蟲PlasmoDB數(shù)據(jù)庫,查找約氏瘧原蟲致死株17XL (Py17XL)的PK9序列信息, BLAST比對Py PK9和惡性瘧原蟲PK9(Pf PK9)以及人蛋白激酶p78的同源性。提取Py17XL株野生型(WT)基因組DNA,設(shè)計(jì)引物, PCR擴(kuò)增PK9基因。采用CRISPR-Cas9技術(shù),將同源臂與sgRNA序列一起連接到PYC-MCS質(zhì)粒中,構(gòu)建PK9基因敲除(PK9KO)重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至Py17XL蟲株內(nèi),經(jīng)乙胺嘧啶篩選、克隆,進(jìn)行PCR鑒定和測序。10只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為WT感染組和PK9KO感染組,每組5只,重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。每鼠腹腔注射1×105個紅內(nèi)期瘧原蟲,每隔24 h取血檢測小鼠原蟲血癥,觀察小鼠存活情況。200只3~5日齡的斯氏按蚊隨機(jī)分為WT感染小鼠吸血組和PK9KO感染小鼠吸血組,每組100只。于吸血8 d后解剖蚊胃,每組隨機(jī)選取15只斯氏按蚊進(jìn)行解剖,測定蚊胃中卵囊的數(shù)量。10只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為WT子孢子感染組和PK9KO子孢子感染組,每組5只,重復(fù)2次實(shí)驗(yàn)。每鼠尾靜脈注射1×103個子孢子,每隔12 h取血,涂片觀察其原蟲血癥出現(xiàn)時間。結(jié)果Py PK9與Pf PK9的序列一致性為82.5%, Py PK9和人類蛋白激酶p78的一致性為39.4%。PK9基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的長度約為597 bp。經(jīng)PCR鑒定、測序確定PK9KO重組質(zhì)粒構(gòu)建成功, Py17XL蟲株成功敲除PK9基因。WT感染組小鼠迅速出現(xiàn)原蟲血癥,感染后5~6 d全部死亡, PK9KO感染組小鼠全部存活,原蟲血癥在感染后17 d消失。WT感染小鼠吸血組和PK9KO感染小鼠吸血組的斯氏按蚊感染率分別為60.0%(9/15)和66.7%(10/15),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。WT子孢子感染組和PK9KO子孢子感染組小鼠均于72 h查見原蟲血癥。結(jié)論P(yáng)K9在紅內(nèi)期Py17XL的毒力中發(fā)揮了重要作用。
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中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病
- 預(yù)計(jì)1-3個月 預(yù)計(jì)審稿周期
- 1.93 影響因子
- 醫(yī)學(xué) 快捷分類
- 雙月刊 出版周期
主管單位：中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會;主辦單位：中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會;中國疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所
