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化學(xué)合成多肽體外抗HBV復(fù)制的研究
- 化學(xué)合成多肽
- 乙型肝炎病毒
- 拉米夫定
摘要：目的觀察人工設(shè)計(jì)并化學(xué)合成的多肽在體外乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制模型中對(duì)HBV-DNA復(fù)制、病毒標(biāo)志物表達(dá)的影響,及其細(xì)胞毒性強(qiáng)弱,篩選高HBV抑制且低細(xì)胞毒性的多肽,探索多肽作為新型HBV抗病毒藥物分子的潛力。方法采用傳統(tǒng)的甲基丙烯酸聚合物平臺(tái)設(shè)計(jì)并合成的7種多肽(KBDT-1、2、3……7,以疏水性及陽(yáng)離子電親和力大小為依據(jù)),將7種化學(xué)合成多肽(10 mg/mL)、拉米夫定(1 mg/mL,陽(yáng)性對(duì)照)、空白溶劑(陰性對(duì)照)作用于HepG 2.2.15細(xì)胞系,檢測(cè)化學(xué)合成多肽對(duì)HBV的抑制作用,采用結(jié)晶紫染色法檢測(cè)細(xì)胞存活率,比較各組藥物對(duì)細(xì)胞毒性的強(qiáng)弱。選取HBV抑制作用最強(qiáng)的多肽,設(shè)置10、1、0.1 mg/mL濃度梯度,分別處理HepG 2.2.15細(xì)胞3、6、9 d后,收集細(xì)胞上清液,采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)病毒DNA拷貝量,化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)HBsAg及HBeAg的變化。結(jié)果從7種化學(xué)合成多肽中篩選出多肽KBDT-2,RT-PCR結(jié)果顯示,KBDT-2具有體外抗HBV復(fù)制作用,且藥物濃度越高,抑制效果越好;化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)顯示,KBDT-2對(duì)HBV生物學(xué)標(biāo)志物HBsAg及HBeAg有抑制作用;結(jié)晶紫染色檢測(cè)結(jié)果顯示,KBDT-2對(duì)HepG 2.2.15無(wú)明顯毒性作用。結(jié)論KBDT-2具有抑制HBV復(fù)制作用,且無(wú)明顯細(xì)胞毒性,可以有效降低HBsAg、HBeAg表達(dá),為探索抗HBV新型藥物提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。
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中國(guó)感染控制
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