摘要：Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase1(HPRT1)基因突變會(huì)導(dǎo)致次黃嘌呤和鳥嘌呤代謝異常,嚴(yán)重的代謝障礙被稱為L(zhǎng)esch-Nyhan綜合征,表現(xiàn)為智力低下,行為上出現(xiàn)強(qiáng)迫性自我毀傷,并伴隨痛風(fēng)或腎結(jié)石等癥狀。HPRT1基因具有多種突變模式,近年來對(duì)其突變譜的研究表明該基因具有一些"突變熱點(diǎn)"。本研究選取了導(dǎo)致翻譯提前終止的熱點(diǎn)突變c.508C>T突變和c.151C>T突變,在HEK293T和HeLa細(xì)胞中,以單鏈寡核苷酸(single-stranded oligo-deoxyribonucleotides,ssODN)作為同源重組模板,利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建了這兩種突變的單克隆細(xì)胞株,發(fā)生定點(diǎn)突變的效率分別為16.3%和10%。進(jìn)一步通過Westernblot檢測(cè)點(diǎn)突變的單克隆細(xì)胞的HPRT1蛋白表達(dá)水平,通過6-TG毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)點(diǎn)突變的單克隆細(xì)胞的次黃嘌呤/鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶活性,結(jié)果表明純合突變的單細(xì)胞克隆不能正常表達(dá)HPRT1蛋白,其次黃嘌呤/鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶活性喪失;雜合突變的單細(xì)胞克隆的HPRT1蛋白表達(dá)量降低,仍具有部分次黃嘌呤/鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶活性。HPRT1基因定點(diǎn)突變細(xì)胞模型的建立可為今后建立其他HPRT1基因突變的細(xì)胞系或動(dòng)物模型提供借鑒,為研究Lesch-Nyhan致病機(jī)制提供基礎(chǔ)。