摘要：目的探討miR-25-3p靶向解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)調(diào)控Notch信號通路對P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響。方法采用二甲基亞砜(DMSO)誘導(dǎo)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化,分別收集誘導(dǎo)分化第0、5、10天的細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測誘導(dǎo)分化過程中心肌分化標(biāo)志物GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、心房利鈉尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法檢測誘導(dǎo)分化過程中ADAM10蛋白水平。通過逆轉(zhuǎn)錄病毒感染P19細(xì)胞過表達(dá)miR-25-3p,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測感染后P19細(xì)胞中miR-25-3p水平, Western blot法檢測感染后P19細(xì)胞ADAM10蛋白水平。生物信息學(xué)軟件預(yù)測并通過熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-25-3p與ADAM10之間的靶向結(jié)合作用。感染后的P19細(xì)胞經(jīng)DMSO誘導(dǎo)分化10d后,免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞中心肌肌鈣蛋白I(cTnI)蛋白的表達(dá)情況,并計(jì)算心肌細(xì)胞分化率;Western blot法檢測GATA4、cTnT、ANP以及Notch信號通路相關(guān)蛋白Notch1、Hes家族bHLH轉(zhuǎn)錄因子1(Hes1)、Hairy相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。結(jié)果P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化的第0、5、10天過程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐漸增加,而miR-25-3p水平逐漸降低;逆轉(zhuǎn)錄病毒感染后, P19細(xì)胞中miR-25-3p水平顯著增加,而ADAM10蛋白水平顯著降低;生物信息學(xué)分析證實(shí)ADAM10為miR-25-3p的靶基因;誘導(dǎo)分化10 d后,過表達(dá)miR-25-3p可顯著降低心肌細(xì)胞分化率,下調(diào)GATA4、cTnT、ANP及Notch信號通路相關(guān)分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。結(jié)論miR-25-3p可顯著抑制P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化,其機(jī)制可能與其靶向抑制ADAM10表達(dá),進(jìn)而抑制Notch信號通路的激活有關(guān)。