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胰島素樣生長因子-1(IGF-1)對小鼠卵丘細胞自噬與胞吞相關(guān)因子表達的影響
- 自噬
- 胞吞
- 卵丘細胞
摘要：卵丘細胞的質(zhì)量對卵母細胞的生長發(fā)育至關(guān)重要,其自噬和胞吞可調(diào)控細胞生長及營養(yǎng)運輸,以應對惡劣環(huán)境對卵母細胞質(zhì)量的威脅.從促排處理的小鼠輸卵管膨大部收集卵丘—卵母細胞復合體(Cumulus oocyte complexes,COCs),分離卵丘細胞進行體外培養(yǎng),并添加0、50、100、150和200 ng/mL IGF-1處理細胞,分別提取細胞總RNA和總蛋白,實時熒光定量PCR檢測各處理組Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2 mRNA的相對表達水平.免疫熒光定位不同蛋白在細胞中的表達,并結(jié)合蛋白免疫印跡(Western-blot,WB)測定不同質(zhì)量濃度IGF-1處理組Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2的蛋白表達水平,分析IGF-1對卵丘細胞自噬和胞吞的影響.結(jié)果顯示:正常培養(yǎng)的卵丘細胞均可表達Atg5、Beclin1、LC3、Cav1、Cav2 mRNA和蛋白,蛋白主要定位在細胞質(zhì).IGF-1可調(diào)控小鼠卵丘細胞Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白的表達,與對照組相比,各處理組的Atg5蛋白表達量均升高;Beclin1和LC3蛋白表達量顯著降低,且在100 ng/mL IGF-1處理組中最低.Cav1和Cav2蛋白在50 ng/mL和200 ng/mL處理組的表達量均顯著降低,但在該質(zhì)量濃度變化范圍內(nèi),隨著IGF-1質(zhì)量濃度增大,2種蛋白的表達量不是線性降低,而是在100 ng/mL和150 ng/mL處理組表達量有回升現(xiàn)象.表明IGF-1可調(diào)控小鼠卵丘細胞的自噬和胞吞相關(guān)因子的表達,調(diào)控效果與IGF-1的質(zhì)量濃度有關(guān).
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西北農(nóng)業(yè)學報
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