摘要：目的:構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)可誘導(dǎo)型polo樣激酶1相關(guān)檢查點(diǎn)解旋酶(PICH)短發(fā)夾RNA(shRNA)的三陰乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231,并通過檢測(cè)加入誘導(dǎo)劑后細(xì)胞的增殖評(píng)價(jià)敲低效果。方法:設(shè)計(jì)并合成2條特異靶向PICH的shRNA序列,用分子克隆技術(shù)構(gòu)建pLKO.1-tet-on-shPICH-Puromycin質(zhì)粒,經(jīng)菌落PCR及基因測(cè)序驗(yàn)證;慢病毒包裝并感染細(xì)胞,通過抗性篩選獲得嘌呤霉素抗性的細(xì)胞;經(jīng)強(qiáng)力霉素(DOX)誘導(dǎo)表達(dá)后,Western印跡檢測(cè)PICH的敲低效果,并通過MTT法對(duì)細(xì)胞增殖進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:菌落PCR凝膠電泳及DNA測(cè)序結(jié)果顯示pLKO.1-tet-on-shPICHPuromycin質(zhì)粒構(gòu)建成功;Western印跡結(jié)果表明,在DOX誘導(dǎo)下,MDA-MB-231細(xì)胞中的PICH蛋白質(zhì)表達(dá)下降,表明可誘導(dǎo)型PICH穩(wěn)定敲低細(xì)胞系構(gòu)建成功;進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MDA-MB-231細(xì)胞的增殖隨PICH的表達(dá)下調(diào)而受到顯著抑制。結(jié)論:構(gòu)建了可誘導(dǎo)穩(wěn)定敲低PICH的三陰乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231,為進(jìn)一步研究PICH在三陰乳腺癌中的作用以及具體的分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。