摘要：采用生物酶催化法替代化學(xué)合成法制備左旋多巴是一條綠色、經(jīng)濟(jì)的合成路線。將來源于弗氏檸檬酸菌酪氨酸酚裂解酶的編碼基因與pKK223-3載體連接,構(gòu)建表達(dá)載體pKK223-TPL,并在大腸桿菌BL21(DE3)中成功表達(dá),構(gòu)建了高活性的基因工程菌;研究了影響酪氨酸酚裂解酶酶活力和穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素,探索了減少副產(chǎn)物生成、提高底物轉(zhuǎn)化率的催化條件。結(jié)果表明:在pH7.5、20℃條件下,控制鄰苯二酚質(zhì)量濃度不超過12g/L、丙酮酸鈉質(zhì)量濃度不超過7.5g/L、以0.4mol/L乙酸銨為氨來源、0.1mmol/LK+為激活劑時(shí),可有效減少副產(chǎn)物的生成,提高酪氨酸酚裂解酶的穩(wěn)定性,經(jīng)過12h反應(yīng),左旋多巴產(chǎn)量達(dá)到122.8g/L,鄰苯二酚的最大轉(zhuǎn)化率達(dá)到98.7%,具有較好的工業(yè)化應(yīng)用潛力。