二硫鍵氧化還原異構(gòu)酶(DsbM)與轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(PA0056)的相互作用

韓笑; 劉宇杰; 馬逸冰; 徐海津; 喬明強(qiáng) 南開大學(xué)分子微生物和技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 天津300071

二硫鍵氧化還原酶
轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子
酵母雙雜交
雙分子熒光互補(bǔ)
銅綠假單胞菌

摘要：二硫鍵氧化還原異構(gòu)酶(disulfide oxidoreductase,DsbM)分布于原核細(xì)胞中,主要參與周質(zhì)空間中膜蛋白的折疊.轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(lysR type transcriptional regulator,PA0056)是一類包含4個半胱氨酸的蛋白,當(dāng)以氧化態(tài)形式存在時,可調(diào)控下游基因的轉(zhuǎn)錄,參與調(diào)節(jié)抗氧化或者抗藥性.本實(shí)驗(yàn)室前期研究證明DsbM參與氨基糖苷類耐藥性的調(diào)節(jié).關(guān)注銅綠假單胞菌中DsbM和PA0056之間的相互作用,分別構(gòu)建了酵母雙雜交(yeast two-hybrid test)和雙分子熒光互補(bǔ)系統(tǒng)(bi-molecular fluorescence complementation, BiFC)的載體.通過酵母雙雜交實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)DsbM和PA0056之間存在較強(qiáng)的蛋白質(zhì)相互作用.通過BiFC實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)共同轉(zhuǎn)化表達(dá)DsbM和PA0056載體的酵母中可觀察到強(qiáng)烈的黃色熒光,表明DsbM和PA0056可以發(fā)生相互作用.本研究為深入研究DsbM在銅綠假單胞菌耐氨基糖苷類抗生素耐藥機(jī)制奠定基礎(chǔ).

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