摘要：【目的】本研究旨在闡明長(zhǎng)足大竹象Cyrtotrachelus buqueti內(nèi)切葡聚糖酶最適反應(yīng)條件,并挖掘長(zhǎng)足大竹象消化道內(nèi)切葡聚糖酶關(guān)鍵基因?！痉椒ā坎捎?,5-二硝基水楊酸(DNS)法,設(shè)置以羧甲基纖維素鈉(MC)為反應(yīng)底物的單因素和正交優(yōu)化試驗(yàn)測(cè)定內(nèi)切葡聚糖酶反應(yīng)的最適條件。通過(guò)對(duì)長(zhǎng)足大竹象發(fā)育轉(zhuǎn)錄組內(nèi)切葡聚糖酶編碼基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并將基因表達(dá)量與酶活性數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,篩選出發(fā)育時(shí)期中關(guān)鍵內(nèi)切葡聚糖酶基因,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)不同發(fā)育時(shí)期長(zhǎng)足大竹象消化道內(nèi)切葡聚糖酶關(guān)鍵基因表達(dá)量進(jìn)行驗(yàn)證確定。【結(jié)果】研究表明,長(zhǎng)足大竹象成蟲(chóng)內(nèi)切葡聚糖酶的最適反應(yīng)條件為:溫度45℃,pH 5.6,底物濃度2%,酶比活力59.85 U/mg(雌)和52.87 U/mg(雄);幼蟲(chóng)內(nèi)切葡聚糖酶的最適反應(yīng)條件為:溫度35℃,pH 4.8,底物濃度2%,酶比活力38.34 U/mg。篩選出長(zhǎng)足大竹象消化道內(nèi)切葡聚糖酶關(guān)鍵基因c64192_g1和c57057_g1。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明c64192_g1和c57507_g1基因在成蟲(chóng)時(shí)期表達(dá)量高于幼蟲(chóng)?！窘Y(jié)論】長(zhǎng)足大竹象雌雄成蟲(chóng)的內(nèi)切葡聚糖酶比活力均高于幼蟲(chóng),存在兩個(gè)影響內(nèi)切葡聚糖酶活性的關(guān)鍵基因c64192_g1和c57507_g1。這些研究成果豐富了內(nèi)切葡聚糖酶來(lái)源,并為長(zhǎng)足大竹象內(nèi)切葡聚糖酶異源表達(dá)提供數(shù)據(jù)參考,進(jìn)而為木質(zhì)纖維素預(yù)處理和生物質(zhì)能源的開(kāi)發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)。