首頁(yè) > 期刊 > 自然科學(xué)與工程技術(shù) > 基礎(chǔ)科學(xué) > 生物學(xué) > 激光生物學(xué)報(bào) > 三種組成型啟動(dòng)子調(diào)控的鼠李糖脂基因在防御假單胞菌中的異源表達(dá)及活性研究 【正文】
三種組成型啟動(dòng)子調(diào)控的鼠李糖脂基因在防御假單胞菌中的異源表達(dá)及活性研究
謝芝玲; 陳漢娜; 鐘林; 徐佳瑩; 李演; 潘登; 劉峰; 丁學(xué)知; 夏立秋; 張友明; 涂強(qiáng) 淡水魚(yú)類(lèi)發(fā)育生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院; 微生物分子生物學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 湖南長(zhǎng)沙410081; 山東大學(xué)亥姆霍茲生物技術(shù)研究所; 微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 山東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院; 山東青島266237; 化學(xué)與分子工程學(xué)院; 青島科技大學(xué); 山東青島266042
- rhlab
- 鼠李糖脂
摘要：本研究利用Red/ETDNA重組技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室已有的含鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶基因RhlAB的分泌表達(dá)載體pBBR1-genta-RhlAB進(jìn)行修飾,將3種不同強(qiáng)度組成型啟動(dòng)子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替換了RhlAB基因在銅綠假單胞菌中的原始啟動(dòng)子,成功獲得了表達(dá)載體pBBR1-genta-Papra-RhlAB,pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB,并將這些表達(dá)載體分別在防御假單胞菌Pf-5中異源表達(dá),通過(guò)LB培養(yǎng)基發(fā)酵42h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂產(chǎn)量為17.56mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-Papra-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB分別是11.135mg/L,441.135mg/L,557.764mg/L,啟動(dòng)子優(yōu)化后產(chǎn)量分別是原始啟動(dòng)子的0.63,25.12和31.76倍。對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析,共檢出相對(duì)含量變化的4類(lèi)質(zhì)核比不同的鼠李糖脂同系物。并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)RhlAB基因的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子替換為Ptac和PrhaB后RhlAB基因表達(dá)量分別是原始啟動(dòng)子的2.16和2.77倍。本研究初步實(shí)現(xiàn)了RhlAB基因在Pf-5中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)組成型啟動(dòng)子Ptac和PrhaB比RhlAB的原始啟動(dòng)子表達(dá)效率更高,可為異源合成鼠李糖脂提供重要參考。
- rhlab
- 鼠李糖脂
摘要：本研究利用Red/ETDNA重組技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室已有的含鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶基因RhlAB的分泌表達(dá)載體pBBR1-genta-RhlAB進(jìn)行修飾,將3種不同強(qiáng)度組成型啟動(dòng)子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替換了RhlAB基因在銅綠假單胞菌中的原始啟動(dòng)子,成功獲得了表達(dá)載體pBBR1-genta-Papra-RhlAB,pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB,并將這些表達(dá)載體分別在防御假單胞菌Pf-5中異源表達(dá),通過(guò)LB培養(yǎng)基發(fā)酵42h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂產(chǎn)量為17.56mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-Papra-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB分別是11.135mg/L,441.135mg/L,557.764mg/L,啟動(dòng)子優(yōu)化后產(chǎn)量分別是原始啟動(dòng)子的0.63,25.12和31.76倍。對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析,共檢出相對(duì)含量變化的4類(lèi)質(zhì)核比不同的鼠李糖脂同系物。并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)RhlAB基因的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子替換為Ptac和PrhaB后RhlAB基因表達(dá)量分別是原始啟動(dòng)子的2.16和2.77倍。本研究初步實(shí)現(xiàn)了RhlAB基因在Pf-5中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)組成型啟動(dòng)子Ptac和PrhaB比RhlAB的原始啟動(dòng)子表達(dá)效率更高,可為異源合成鼠李糖脂提供重要參考。
注：因版權(quán)方要求，不能公開(kāi)全文，如需全文，請(qǐng)咨詢雜志社
激光生物學(xué)報(bào)
- 預(yù)計(jì)1-3個(gè)月 預(yù)計(jì)審稿周期
- 0.38 影響因子
- 生物 快捷分類(lèi)
- 雙月刊 出版周期
主管單位：中國(guó)科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì);主辦單位：中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)
