摘要：為了構(gòu)建具有asd基因缺失和LacI蛋白表達(dá)調(diào)控的豬霍亂沙門氏桿菌C500株,試驗(yàn)以豬霍亂沙門氏桿菌C500株為載體,對其基因組進(jìn)行改造,使沙門氏桿菌asd基因缺失,隨后將araC PBADLacI序列置于其中,構(gòu)建包含araC PBAD-LacI基因表達(dá)框的豬霍亂沙門氏桿菌C500Δasd基因突變株以及包含Ptrc啟動(dòng)子的EGFP表達(dá)質(zhì)粒pYA4514-EGFP,并驗(yàn)證是否有LacI蛋白表達(dá)。結(jié)果表明:試驗(yàn)成功構(gòu)建出包含araC PBAD-LacI基因表達(dá)框的豬霍亂沙門氏桿菌C500Δasd基因突變株,以及包含Ptrc啟動(dòng)子的EGFP表達(dá)質(zhì)粒pYA4514-EGFP;Western-blot檢測驗(yàn)證了突變菌在阿拉伯糖存在的條件下可大量表達(dá)LacI蛋白,而當(dāng)pYA4514-EGFP質(zhì)粒上的Ptrc啟動(dòng)子受到抑制時(shí),EGFP蛋白不表達(dá);用IPTG誘導(dǎo)后可以消除LacI對Ptrc啟動(dòng)子的抑制作用,EGFP蛋白表達(dá)。說明試驗(yàn)成功構(gòu)建了調(diào)控表達(dá)LacI蛋白的豬霍亂沙門氏桿菌C500Δasd基因突變株。