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羅非魚羅湖病毒RT-PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用
- 羅非魚
- 羅湖病毒
- 快速檢測
摘要：【目的】建立快速檢測羅非魚羅湖病毒(Tilapia Lake Virus,Ti LV)的RT-PCR方法。【方法】參照GenBank中羅非魚羅湖病毒全基因序列,依據(jù)其假定蛋白基因片段3設(shè)計合成1對特異性擴(kuò)增引物,提取羅湖病毒RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,通過優(yōu)化擴(kuò)增條件和擴(kuò)增體系,建立快速檢測羅非魚羅湖病毒的RT-PCR方法。用該方法對自然感染羅湖病毒發(fā)病的羅非魚樣品進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增?！窘Y(jié)果】RT-PCR擴(kuò)增得到與試驗設(shè)計相符的499 bp的特異性目的條帶,而對健康羅非魚、野生羅非魚及其他病毒對照組的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。測序比對結(jié)果表明,該方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確,最低可檢測出約10fg/mL的質(zhì)粒DNA,具有較好的特異性和較高的敏感性。用該方法對332份臨床樣品進(jìn)行RT-PCR檢測,其中36份樣品擴(kuò)增出特異性的目的條帶,經(jīng)測序比對,檢測結(jié)果正確?！窘Y(jié)論】建立的檢測方法可用于TiLV的檢測。
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廣東海洋大學(xué)學(xué)報
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