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Vip3Aa10與甜菜夜蛾刷狀緣膜囊泡的結(jié)合特性
- vip3aa10
- 甜菜夜蛾
- 刷狀緣膜囊泡
- 殺蟲(chóng)活性
摘要：【目的】營(yíng)養(yǎng)期殺蟲(chóng)蛋白Vip3A是一種由蘇云金芽孢桿菌在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期產(chǎn)生的新型殺蟲(chóng)毒素.Vip3A與敏感昆蟲(chóng)中腸上皮細(xì)胞的結(jié)合是其發(fā)揮殺蟲(chóng)活性的關(guān)鍵步驟.為進(jìn)一步探究Vip3A毒素的殺蟲(chóng)機(jī)理,研究Vip3Aa10與甜菜夜蛾刷狀緣膜囊泡(BBMVs)的結(jié)合特性.【方法】在大腸桿菌中用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)Vip3Aa10,用親和層析和離子交換層析的方法純化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10-T.然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10-T對(duì)甜菜夜蛾的殺蟲(chóng)活性,用免疫印跡法和配體印跡法分析Vip3Aa10-T與甜菜夜蛾BBMVs的結(jié)合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的結(jié)合蛋白.【結(jié)果】Vip3Aa10-T與Vip3Aa10前毒素對(duì)甜菜夜蛾的殺蟲(chóng)活性很高.Vip3Aa10-T在pH8.0時(shí)更容易與甜菜夜蛾BBMVs結(jié)合,并且能夠與非敏感性昆蟲(chóng)黃粉蟲(chóng)BBMVs結(jié)合.在相同pH條件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10-T更容易與甜菜夜蛾BBMVs結(jié)合.Vip3Aa10-T在甜菜夜蛾BBMVs上有4條結(jié)合蛋白,其分子量分別為80、38、31和22kDa.【結(jié)論】活化的Vip3Aa10與甜菜夜蛾BBMVs的結(jié)合是pH依賴(lài)性的,并且能與BBMVs上的4個(gè)蛋白結(jié)合.
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